Методические указания по контролю работы паровых и воздушных стерилизаторов

Методические указания
по контролю работы паровых и воздушных стерилизаторов

(утв. Главным эпидемиологическим управлением Минздрава СССР
от 28 февраля 1991 г. № 15/6-5)

1. Общие положения

1.1. Методические указания предназначены для персонала дезинфекционных и санитарно-эпидемиологических станций, а также персонала лечебно-профилактических учреждений (ЛПУ), осуществляющих контроль работы паровых и воздушных стерилизаторов.

1.2. Контроль осуществляют физическим, химическим и бактериологическим методами. Для контроля используют средства измерения температуры, давления, времени, химические тесты, термохимические индикаторы и биотесты.

1.3. Физический и химический методы контроля являются методами оперативного контроля параметров режимов работы паровых и воздушных стерилизаторов (температура стерилизации, давление, время стерилизационной выдержки), результаты которого учитывают в процессе стерилизационного цикла или сразу после его окончания (максимальная температура, достигнутая в ходе стерилизационного цикла). Бактериологический метод контроля позволяет контролировать эффективность работы стерилизатора.

1.4. Контроль работы стерилизаторов в ЛПУ включает контроль после монтажа и ремонта аппарата и контроль в процессе его эксплуатации. Последний подразделяют на плановый контроль, самоконтроль и контроль по показаниям, который проводят при получении неудовлетворительных результатов контроля стерильности изделий медицинского назначения, неудовлетворительных результатов физического, химического и бактериологического контроля.

1.5. В функции персонала дезинфекционных станций и дезинфекционных отделов (отделений) санитарно-эпидемиологических станций входит контроль работы стерилизатора после монтажа и ремонта, плановый контроль, а также контроль по показаниям при обнаружении неудовлетворительных результатов контроля стерильности изделий медицинского назначения.

1.6. В функции персонала ЛПУ входит самоконтроль работы аппаратов и контроль по показаниям при получении неудовлетворительных результатов физического и химического контроля, неудовлетворительных результатов контроля стерильности изделий медицинского назначения.

1.7. Контроль работы стерилизатора после монтажа и ремонта аппарата, плановый контроль и контроль по показаниям, проводимый персоналом дезинфекционных станций, дезинфекционных отделов (отделений) санитарно-эпидемиологических станций, осуществляют физическим, химическим и бактериологическим методами. Самоконтроль работы аппаратов и контроль по показаниям, проводимый персоналом ЛПУ, осуществляют физическим и химическим методами.

1.8. Плановый контроль работы всех стерилизаторов в объектах надзора проводят в порядке государственного санитарного надзора не реже 2 раз в год.

Самоконтроль работы стерилизатора проводят при каждой загрузке аппарата.

По окончании цикла стерилизации регистрируют показания термометров и сопоставляют их между собой, а также с номинальной температурой стерилизации.

ОСТ 42-21-2-85 .

2.4.2. Давление в стерилизационной камере парового стерилизатора измеряют при помощи мановакуумметра. Класс точности мановакуумметра должен быть не ниже 2,5. Предел измерения от 0,1 до 0,5 МПа (от 1 до 5 кгс/см 2).

Установку давления на манометре парового стерилизатора, соответствующего заданной температуре стерилизации, проводят согласно приложению .

2.4.3. Ежедневно перед началом рабочей смены проводят контроль герметичности камеры стерилизатора, снабженного вакуумным насосом, по следующей методике:

Для контроля герметичности в рабочей камере создают максимально возможное разрежение. При выключенном вакуумнасосе давление в камере не должно изменяться в течение времени, которое предусмотрено инструкцией по эксплуатации для сушки материалов после стерилизации. Повышение давления в камере более 0,005 МПа (0,05 кгс/см 2) указывает на подсос воздуха.

По окончании цикла стерилизации регистрируют показания термометров и сопоставляют их с номинальной температурой стерилизации.

Отклонения в показаниях максимальных термометров допускаются в пределах, регламентированных ОСТ 42-21-2-85 .

2.5.3. Хронометраж цикла стерилизации проводят аналогично п. .

2.6. Периодически и по показаниям персонал проводит самоконтроль работы паровых и воздушных стерилизаторов по методике с прерванным циклом стерилизации, которая позволяет оценить температурные параметры режимов работы стерилизаторов в процессе стерилизационного цикла с использованием максимальных термометров и химических тестов.

Методика самоконтроля паровых стерилизаторов с использованием химических тестов изложена в п. .

Работу воздушного стерилизатора прекращают через 30 минут стерилизационной выдержки.

Оценку показаний максимальных термометров проводят аналогично п. .

Методика самоконтроля работы воздушных стерилизаторов с использованием химических тестов изложена в п. .

2.7. Правильность показаний термометров перед проведением контроля проверяют путем погружения их в кипящую воду в открытом сосуде на 6 - 7 минут (ртутный шарик термометра не должен касаться стенок сосуда с водой). Если термометры показывают температуру 100 ± 1 °С, их считают исправными.

3.3.2. Упакованные химические тесты (п. ) нумеруют и размещают в контрольные точки паровых (приложение ) и воздушных (приложение ) стерилизаторов.

Приложение 1. Расположение контрольных точек в паровых стерилизаторах Приложение 2. Расположение контрольных точек в воздушных стерилизаторах Приложение 3. Давление и соответствующая давлению температура Приложение 4. Методика изготовления химического теста для оперативного контроля температурных параметров режимов работы паровых и воздушных стерилизаторов Приложение 5. Методика приготовления биотестов, используемых для контроля работы паровых и воздушных стерилизаторов и культивирования тест-культур после стерилизации Приложение 6. Методика приготовления биотестов, используемых для контроля работы паровых стерилизаторов, и культивирования тест-культуры B.stearothermophilus BKM В-718 после стерилизации Приложение 7. Методика приготовления биотестов, используемых для контроля работы воздушных стерилизаторов, и культивирования тест-культуры B.licheniformis штамм G после стерилизации Приложение 8. Методика приготовления питательных сред

Методические указания по контролю работы паровых и воздушных стерилизаторов
(утв. Главным эпидемиологическим управлением Минздрава СССР от 28 февраля 1991 г. N 15/6-5)

1. Общие положения

1.8. Плановый контроль работы всех стерилизаторов в объектах надзора проводят в порядке государственного санитарного надзора не реже 2 раз в год. Самоконтроль работы стерилизатора проводят при каждой загрузке аппарата.

1.9. При проведении контроля контрольные тесты (максимальные термометры, химические тесты, термохимические индикаторы и биотесты упаковывают вместе в пакеты из упаковочной бумаги (ОСТ 42-21-2-85), нумеруют и размещают по схеме в контрольные точки паровых (приложение 1) и воздушных (приложение 2) стерилизаторов.

1.10. При проведении контроля персоналом дезинфекционных станций и дезинфекционных отделов (отделений) санитарно-эпидемиологических станций протокол контроля работы стерилизатора составляют в двух экземплярах. Один экземпляр направляют главному врачу ЛПУ после получения результатов бактериологического контроля.

1.10.1. Изделия медицинского назначения без индивидуальной упаковки, стерилизовавшиеся в стерилизационных коробках, в которые закладывали средства контроля, подлежат повторной стерилизации после их извлечения.

1.10.2. При контроле объекта надзора проверяют оснащенность ЛПУ стерилизационным оборудованием и средствами контроля, санитарное состояние помещения стерилизационной, знание и практические навыки персонала в обслуживании аппаратов, наличие необходимой документации.

1.11. При осуществлении самоконтроля работы аппаратов персонал, обслуживающий стерилизатор, закладывает максимальные термометры (раздел 2), химические тесты и термохимические индикаторы (раздел 3) в стерилизационную камеру, следит на протяжении цикла стерилизации за показаниями контрольно-измерительных приборов, оценивает результаты контроля и дает заключение о возможности выдачи простерилизованных изделий.

1.11.1. Медицинский персонал, использующий стерилизованные изделия, закладывает химические тесты и термохимические индикаторы (раздел 3) в стерилизационные коробки или внутрь стерилизуемых упаковок, оценивает результаты контроля и принимает решение о возможности использования простерилизованных изделий.

1.11.2. Персонал, обслуживающий стерилизационное оборудование, регистрирует этапы процесса стерилизации и результаты физического и химического контроля в журнале, пронумерованном, прошнурованном и скрепленном печатью медицинского учреждения. Форма журнала в соответствии с формой 257/у, утв. МЗ СССР N 1039 от 04.10.89 г.

1.11.3. Ответственность за организацию стерилизационных мероприятий в ЛПУ, включая организацию самоконтроля работы стерилизационной аппаратуры, возлагается на главного врача данного учреждения.

1.12. Загрузка паровых и воздушных стерилизаторов при всех видах контроля регламентирована "Методическими рекомендациями по организации централизованных стерилизационных в лечебно-профилактических учреждениях", утв. МЗ СССР N 15-6/8 от 31.01.91 г.

2. Физический метод контроля

2.1. Физический метод контроля предназначен для оперативного контроля параметров режимов работы паровых и воздушных стерилизаторов (температура стерилизации, давление, время стерилизационной выдержки). Результаты контроля позволяют оперативно выявить неисправность аппарата и контрольно-измерительных приборов и ориентировочно оценить правильность загрузки стерилизатора в каждом конкретном случае.

2.2. Физический метод контроля работы стерилизаторов осуществляют с помощью средств измерения температуры (термометр, термометр максимальный), давления (мановакуумметр) и времени (секундомер, часы).

2.3. Параметры режима работы стерилизатора следует проверять в течение цикла стерилизации, проводимого в соответствии с паспортом на аппарат.

2.4. Контроль параметров режимов работы паровых стерилизаторов:

2.4.1. Контроль температурного параметра режимов работы паровых стерилизаторов осуществляют с использованием термометра ртутного стеклянного максимального с диапазоном измерения от 0 до 150°С (ТП-7). Погрешность измерения не должна превышать +-1°С.

ОСТ 42-21-2-85 .

Установку давления на манометре парового стерилизатора, соответствующего заданной температуре стерилизации, проводят согласно прил. 3 .

Для контроля герметичности в рабочей камере создают максимально возможное разрежение. При выключенном вакуумнасосе давление в камере не должно изменяться в течение времени, которое предусмотрено инструкцией по эксплуатации для сушки материалов после стерилизации. Повышение давления в камере более 0,005 МПа (0,05 кгс/см2) указывает на подсос воздуха.

2.4.4. Хронометраж цикла стерилизации проводят с помощью механического секундомера по ГОСТ 5072-79, класс точности 2,0 или часов наручных механических с погрешностью суточного хода +-1 минута.

2.5. Контроль параметров режимов работы воздушных стерилизаторов.

2.5.1. Контроль температурного параметра режимов работы воздушных стерилизаторов в течение цикла стерилизации проводят путем наблюдения за показаниями приборов, установленных на стерилизаторе (термометр, индикаторные устройства на панели аппарата).

2.5.2. Распределение температур внутри загруженной стерилизационной камеры проводят с использованием термометра ртутного стеклянного максимального с диапазоном измерения от 0 до 200°С (ТП-25). Погрешность измерения температуры не должна превышать +-1°С.

Упакованные максимальные термометры (п. 1.9) нумеруют и размешают# в контрольные точки камеры воздушных стерилизаторов в соответствии с прил. 2 .

Отклонения в показаниях максимальных термометров допускаются в пределах, регламентированных ОСТ 42-21-2-85 .

2.6.1. Самоконтроль работы паровых стерилизаторов проводят по следующей методике: упакованные максимальные термометры (п. 1.9 прил. 1

п. 2.4.1 .

Методика самоконтроля паровых стерилизаторов с использованием химических тестов изложена в п. 3.3.5.1 .

2.6.2. Самоконтроль работы воздушных стерилизаторов проводят по следующей методике: упакованные максимальные термометры (п. 1.9 прил. 2 .

Работу воздушного стерилизатора прекращают через 30 минут стерилизационной выдержки.

Оценку показаний максимальных термометров проводят аналогично п. 2.5.2 .

Методика самоконтроля работы воздушных стерилизаторов с использованием химических тестов изложена в п. 3.3.5.2 .

2.7. Правильность показаний термометров перед проведением контроля проверяют путем погружения их в кипящую воду в открытом сосуде на 6-7 минут (ртутный шарик термометра не должен касаться стенок сосуда с водой). Если термометры показывают температуру 100+-1°С, их считают исправными.

2.8. При обнаружении неудовлетворительных результатов контроля в процессе стерилизационного цикла и после его окончания загрузку считают непростерилизованной. Аппарат прекращают использовать, анализируют правильность осуществления требуемого режима стерилизации, правильность загрузки и исправность аппарата. При обнаружении неисправности специально выделенное лицо, ответственное за проведение стерилизации медицинского инструментария, вызывает представителя ПО "Медтехника" для ее устранения.

Стерилизатор разрешают использовать после устранения причин неудовлетворительной работы стерилизатора и получения удовлетворительных результатов контроля.

3. Химический метод контроля

3.1. Химический метод контроля предназначен для оперативного контроля одного или в совокупности нескольких параметров режимов работы паровых и воздушных стерилизаторов.

3.2. Химический метод контроля работы стерилизаторов осуществляют с помощью химических тестов и термохимических индикаторов.

3.3. Химический тест представляет запаянную с обоих концов стеклянную трубку, заполненную смесью химического соединения с органическим красителем или только химическим соединением (веществом), изменяющим свое агрегатное состояние и цвет при достижении определенной для него температуры плавления.

3.3.3. По окончании стерилизации химические тесты вынимают из стерилизатора и визуально определяют изменение их агрегатного состояния и цвета.

3.3.3.1. При удовлетворительном результате контроля химические тесты должны равномерно расплавиться и изменить цвет, что свидетельствует о достижении заданной температуры стерилизации.

3.3.3.2. При неудовлетворительном результате контроля равномерное расплавление и изменение цвета химических тестов отсутствует, т.е. заданная температура стерилизации не была достигнута.

3.3.4. При обнаружении неудовлетворительных результатов химического контроля поступают, как указано в п. 2.8 .

3.3.5. Самоконтроль работы паровых и воздушных стерилизаторов с использованием химических тестов.

Таблица 1

Рецептуры химических тестов для контроля температурных параметров режимов работы паровых стерилизаторов

N рецептуры	Наименование составных частей	Цвет, форма кристаллов, запах		Количество компонента, г
N рецептуры	Наименование составных частей	Цвет, форма кристаллов, запах		Количество компонента, г

	Антипирин(1)	Бесцветные кристаллы или белый порошок без запаха	ГФ X(2), с.65
	Краситель(4) Фуксин кислый или Феноловый красный или Бромтимоловый синий или Генциано-фиолетовый		ТУ 6-09-3803-82 ТУ 6-09-5170-84 ТУ 6-09-2086-77
	Резорцин	Белый или со слабым желтоватым оттенком кристаллический порошок со слабым характерным запахом
	Краситель
	Сера элементарная (5)	Желтые кристаллы	ТУ 6-09-2546-77
	Кислота бензойная
	Краситель
	Кислота бензойная	Бесцветные игольчатые кристаллы или белый порошок
	Краситель
	Д(+)-Манноза	Бесцветные кристаллы в виде ромбических призм	ТУ 6-09-07-666-76
	Краситель
	Никотинамид	Белый кристаллический порошок со слабым запахом	ТУ 6-09-08-852-82
	Краситель
	Мочевина	Бесцветные кристаллы
	Краситель

Примечание: (1) - относится к сильнодействующим лекарственным средствам, применение и хранение которых должно проводиться с предосторожностью: хранение в закрытых шкафах, в сухом помещении.

(2) - ГФ X - Государственная фармакопея СССР, X издание.

(3) - "+" - температурный параметр, для контроля которого используют химическое соединение.

(4) - используют любой из красителей, перечисленных в рецептуре 1,

(5) - при использовании серы в качестве химического теста добавление красителя нецелесообразно, так как при плавлении вещества не происходит его смешение с красителем.

Таблица 2

Химические тесты для контроля температурных параметров режимов работы воздушных стерилизаторов

Наименование химического соединения	Цвет, форма кристаллов, запах	Нормативно-техническая документация	Количество элемента, г	Температурный параметр, подлежащий контролю, °С
Наименование химического соединения	Цвет, форма кристаллов, запах	Нормативно-техническая документация	Количество элемента, г
Левомицетин *(2)	Белый или белый со слабым желто-зеленым оттенком кристаллический порошок без запаха	ГФ Х(3), с.371
Кислота винная	Порошок белого цвета или прозрачные бесцветные кристаллы
Гидрохинон	Бесцветные или светлосерые серебристые кристаллы
Тиомочевина	Блестящие бесцветные кристаллы

Примечание: (1) - В состав химических тестов, используемых для контроля работы воздушных стерилизаторов, краситель не добавляют, т.к. указанные химические соединения изменяют свой цвет при достижении температуры плавления. (2) - Относится к сильнодействующим лекарственным средствам, применение и хранение которых должно проводиться с предосторожностью: хранение в закрытых шкафах, в сухом помещении. (3) - ГФ X - Государственная Фармакопея СССР X издание. (4) - "+" - температурный параметр, для контроля которого используют химическое соединение.

3.3.5.1. Самоконтроль работы паровых стерилизаторов (п. 2.6.1п. 1.9) нумеруют и размещают в контрольные точки паровых стерилизаторов в соответствии с прил. 1 . Работу парового стерилизатора прекращают через 7 минут стерилизационной выдержки.

п. 3.3.3 .

3.3.5.2. Самоконтроль работы воздушных стерилизаторов (п. 2.6.2) проводят по следующей методике: упакованные химические тесты (п. 1.9) нумеруют и размещают в контрольные точки воздушных стерилизаторов в соответствии с приложением 2 . Работу воздушного стерилизатора прекращают через 30 минут стерилизационной выдержки.

Оценку показаний химических тестов проводят аналогично п. 3.3.3 .

При обнаружении неудовлетворительных результатов химического контроля поступают, как указано в п. 2.8 .

3.4. Термохимические индикаторы предназначены для оперативного контроля одного (температура) или совокупности нескольких параметров режимов работы паровых (температура, наличие остаточного воздуха, присутствие водяного насыщенного пара под избыточным давлением) и воздушных стерилизаторов (температура и время стерилизации).

3.4.1. Термохимический индикатор представляет собой полоску бумаги, на которую нанесена термоиндикаторная краска. Определение параметров, достигнутых в процессе стерилизации, основано на изменении цвета термоиндикаторной краски при достижении "температуры перехода", строго определенной для каждой краски.

3.4.2. Для контроля соблюдения параметров режимов работы паровых стерилизаторов могут быть использованы импортные средства контроля "Indicator Tape", "Sterikig А С", выпускаемые фирмой "Wipak Medical" (Финляндия), "Strate-line sterilization Monitor", выпускаемые фирмой "Propper Mfg. Co" Inc., L.I.C., N.Y. 1101", "Autoclave Indicator Tape", выпускаемые фирмой "3М Со" (США) и др., в соответствии с инструкцией по применению.

3.4.4. Методика подготовки термоиндикаторных красок к употреблению и меры предосторожности при работе с ними изложены в инструкции завода-изготовителя.

3.4.5. Термохимические индикаторы готовят следующим образом: термоиндикаторную краску тщательно размешивают, затем кистью тонким слоем наносят на листы белой писчей бумаги, дают высохнуть при комнатной температуре в течение 10-15 минут. Затем нарезают полоски размером 1x2-1x3 см. Термохимические индикаторы можно хранить до 1 года при комнатной температуре в местах, защищенных от света.

Таблица 3

Термоиндикаторные краски для контроля параметров режимов работы воздушного стерилизатора при температуре 180(+2)-10°С, время выдержки - 60 минут

Марка термоиндикаторной краски	Минимально допустимая температура стерилизации,	Цвет краски		Характеристика термоиндикаторной краски
Марка термоиндикаторной краски	Минимально допустимая температура стерилизации,	исходный	после воздействия	Характеристика термоиндикаторной краски
		светло-розовый	темно-коричневый	Свидетель достижения минимально допустимой температуры 170°С
		светло-зеленый	коричневый	Показатель длительности поддержания температуры 170°С в течение 15-20 минут

Примечание: Краски изготавливает Рижский лакокрасочный завод. Адрес завода: 226007, г. Рига, ул. Даугавпилс, 63/65.

3.4.6. Пронумерованные термохимические индикаторы размещают в контрольные точки воздушных стерилизаторов в соответствии с прил. 4 (приклеивают или прикрепляют на пакеты с контрольными тестами или на упаковку стерилизуемых изделий).

3.4.7. По окончании стерилизации термохимические индикаторы вынимают из стерилизатора и визуально определяют изменение их цвета.

3.4.7.1. При удовлетворительном результате контроля термохимические индикаторы должны изменить цвет до заданного, что свидетельствует о соблюдении параметров режима стерилизации.

3.4.7.2. При неудовлетворительном результате контроля изменение цвета термохимических индикаторов до заданного отсутствует, т.е., параметры режима стерилизации не соблюдены.

3.4.8. При обнаружении неудовлетворительных результатов термохимических индикаторов поступают, как указано в п. 2.8 .

4. Бактериологический метод контроля

4.1. Бактериологический метод контроля предназначен для контроля эффективности работы стерилизаторов на основании выявления гибели спор тест-культур.

4.2. Бактериологический метод контроля работы стерилизаторов осуществляют с помощью биотестов.

4.3. Биотест представляет собой дозированное количество тест-культуры на носителе (или в нем), помещенном в упаковку. Упаковка предназначена для сохранения целостности носителя со спорами и предупреждения вторичного обсеменения после стерилизации.

4.5. Бактериологическая лаборатория выдает биотесты в пакетах из упаковочной бумаги (ОСТ 42-21-2-85), запечатанных в полиэтиленовые пакеты, которые служат для доставки биотестов.

4.7. По окончании стерилизации биотесты вынимают из стерилизатора, помещают в полиэтиленовый пакет и в тот же день доставляют в бактериологическую лабораторию с сопроводительным бланком.

4.8. Культивирование тест-культур после бактериологического контроля работы стерилизаторов осуществляют в соответствии с приложением 5 .

4.9. При получении от бактериологической лаборатории извещения по телефону при заключении о неудовлетворительных результатах бактериологического контроля поступают, как указано в п. 2.8 .

Стерилизатор разрешают использовать после устранения причин неудовлетворительной работы стерилизатора и получения удовлетворительных результатов бактериологического контроля.

5. Показатели качества работы стерилизаторов

5.1. Показателем качества работы стерилизаторов при соблюдении заданных условий их эксплуатации является соответствие отклонения температуры в различных точках камеры стерилизатора регламентированным, о чем свидетельствуют:

Показания максимальных термометров;

Изменение исходного состояния химических тестов (агрегатное состояние и цвет);

Изменение цвета термохимических индикаторов;

Отсутствие роста тест-культур в биотесте при культивировании после стерилизации.

6. Причины неудовлетворительных результатов контроля работы паровых и воздушных стерилизаторов

6.1. К причинам неудовлетворительных результатов контроля работы паровых и воздушных стерилизаторов следует отнести:

Неисправность стерилизатора (негерметичность камеры, дефекты прокладок, неисправность нагревательных элементов) или контрольно-измерительной аппаратуры (неисправность термометра, манометра);

Неполное удаление воздуха из камеры парового стерилизатора перед стерилизацией;

Избыточную, неравномерную или неправильную загрузку стерилизационной камеры;

Нарушение режима стерилизации;

Использование упаковочного материала, не предусмотренного ОСТ 42-21-2-85 - металлические пеналы (воздушная стерилизация), клеенка (паровая стерилизация);

Нарушение режима вентиляции (проникновение "загрязненного" воздуха через фильтр аппарата).

Откройте актуальную версию документа прямо сейчас или получите полный доступ к системе ГАРАНТ на 3 дня бесплатно!

Если вы являетесь пользователем интернет-версии системы ГАРАНТ, вы можете открыть этот документ прямо сейчас или запросить по Горячей линии в системе.

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ
И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Контроль удаления воздуха
в паровых стерилизационных камерах

Методические указания
МУК 4.2.1990-05

1. Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Л.С. Бойко); ФГУЗ «Федеральный центр гигиены и эпидемиологии» Роспотребнадзора (Н.С. Кривопалова); Научно-исследовательским институтом дезинфектологии (И.М. Абрамова, В.В. Дьяков); ФГУ «Клиническая больница Управления делами Президента РФ» (С.М. Савенко); Научно-производственной фирмой «ВИНАР» (Н.С. Васильев, В.С. Андреев, О.Д. Лямкина, Н.Е. Червякова); Городской клинической больницей № 4 г. Москвы (П.А. Демидов).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 16 июня 2005 г. (протокол № 2).

3. Утверждены и введены в действие Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 14 июля 2005 г.

4. Введены впервые.

УТВЕРЖДАЮ

Руководитель Федеральной службы

по надзору в сфере защиты прав

потребителей и благополучия человека,

Главный государственный санитарный

врач Российской Федерации

Г.Г. Онищенко

Дата введения: с момента утверждения

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Контроль удаления воздуха в паровых стерилизационных камерах

Методические указания

МУК 4.2.1990-05

1.3. Методические указания предназначены для использования органами и учреждениями Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут использоваться организациями здравоохранения и организациями, эксплуатирующими и контролирующими паровые стерилизаторы.

2. Общие положения

2.1. Контроль удаления воздуха при паровой стерилизации организовывают в соответствии с производственными условиями, требованиями стандартов и настоящих методических указаний.

Процесс паровой обработки

Параметры режима паровой обработки

Тестовый режим

время, мин

давление пара, МПа

Гравитационные паровые стерилизаторы

Стерилизация

120 +2 °C 45 мин

132 ± 2

0,20 ± 0,02

(132 ± 2) °C 20 мин

Дезинфекция (обеззараживание)

120 +2 °C 45 мин

126 ± 2

0,15 ± 0,02

(126 ± 2) °C 30 мин

132 ± 2

0,20 ± 0,02

(132 ± 2) °C 20 мин

Форвакуумные паровые стерилизаторы

Стерилизация

121 ± 1

0,11 ± 0,01

(121 ± 1) °C 20 мин

126 ± 1

0,15 ± 0,01

(126 ± 1) °C 10 мин

134 ± 1

0,20 ± 0,01

(134 ± 1) °C 5 мин

3. Сущность метода

3.1. При паровой стерилизации стерилизующим агентом является сухой насыщенный водяной пар. Сухой насыщенный пар под давлением обладает выраженным спороцидным действием. Проникновение пара внутрь упаковок и пористых изделий напрямую связано с удалением воздуха. Воздух должен быть удален не только из пространства камеры, но и из каналов и полостей стерилизуемых изделий, а также пор материалов (резины, текстиля, ваты и т.д.). Остаточный воздух препятствует равномерному и быстрому проникновению пара в труднодоступные места и, соответственно, замедляет процесс прогрева стерилизуемых изделий и ставит под сомнение качество стерилизации в условиях утвержденных режимов стерилизации.

Между удалением воздуха из пористой загрузки и ее прогревом за счет проникновения водяного пара существует непосредственная связь - чем лучше удален воздух, тем быстрее прогревается загрузка. В гравитационных стерилизаторах невозможно полное удаление воздуха. Удаление воздуха считают достаточно полным, если достигаются условия для эффективной стерилизации в самой трудностерилизуемой точке загрузки. В соответствии с ГОСТ Р 51935 -02 в качестве наиболее трудностерилизуемой пористой упаковки принята стандартная тестовая упаковка из хлопчатобумажных простыней.

3.2. Метод основан на использовании стандартной тестовой упаковки, соответствующей ГОСТ Р 51935 -02, с химическими индикаторами (Тест-ИХ) и/или биологическими индикаторами (Тест-ИБ), закладываемыми в центр упаковки. Стандартная тестовая упаковка имитирует наиболее трудностерилизуемую пористую загрузку.

Достижение конечного состояния химическими индикаторами и/или инактивация биологических индикаторов в тестовой упаковке указывает на обеспечение условий эффективной стерилизации и, соответственно, на удовлетворительное удаление воздуха из стерилизуемых изделий.

3.3. Испытания гравитационных паровых стерилизаторов проводят в тестовых циклах со следующими параметрами выдержки: 120 +2 °C 45 мин, (126 ± 2) °C 30 мин и (132 ± 2) °C 20 мин.

3.4. При стерилизации изделий медицинского назначения стерилизационный и тестовый циклы совпадают (120 +2) °C 45 мин, (132 ± 2) °C 20 мин, (121 ± 1) °C 20 мин, (126 ± 1) °C 10 мин, (134 ± 1) °C 5 мин), что позволяет осуществлять контроль удаления воздуха в процессе стерилизации изделий медицинского назначения.

3.5. Контроль удаления воздуха проводят только в паровых стерилизаторах с прогретой не менее 5 мин стерилизационной камерой на температуру тестового цикла.

3.6. Контроль удаления воздуха проводят при полной загрузке камеры стерилизатора в соответствии с требованиями нормативных документов. Полная загрузка камеры состоит из стандартной тестовой упаковки и упакованных хлопчатобумажных изделий (в пакетах и/или стерилизационных коробках).

3.7. Стандартную тестовую упаковку размещают внутри камеры стерилизатора в месте, указываемом изготовителем в качестве наиболее холодной зоны. В случае отсутствия такого указания тестовую упаковку необходимо располагать в контрольной точке № 1 на нижней полке у загрузочной двери (в горизонтальных камерах) или под крышкой стерилизационной камеры (в вертикальных камерах) в соответствии с рис. . Остаток полезного пространства необходимо заполнить упаковками и/или стерилизационными коробками с хлопчатобумажными изделиями.

3.8. Стандартную тестовую упаковку располагают так, чтобы она никакими своими частями не касалась стенок, загрузочной двери или крышки паровой камеры. Для этого тестовую упаковку необходимо размещать в специальной проволочной корзине или на специальной подставке, приведенной на рис. .

4. Описание тестов на удаление воздуха

4.1. Контроль удаления воздуха осуществляют с применением следующих тестов:

Тест-ИХ представляет собой стандартную тестовую упаковку, соответствующую ГОСТ Р 51935 -02, с химическими индикаторами в геометрическом центре;

Тест-ИБ представляет собой стандартную тестовую упаковку, соответствующую ГОСТ Р 51935 -02, с биологическими индикаторами на основе спор Bacillus stearothermophilus в геометрическом центре. Тест-ИБ одновременно является тестом на микробиологическую эффективность стерилизации.

Стандартная тестовая упаковка состоит из 17 гладких хлопчатобумажных простыней размером 1500 ´ 2000 мм. Количество нитей основы должно быть 30 ± 6 на см, количество нитей утка 27 ± 5 на см. Размер упаковки 220 ´ 300 ´ 250 мм. Общая масса тестовой упаковки без индикаторов (7 ± 0,7) кг. Простыни (новые и загрязненные) предварительно тщательно постирать, не подвергая обработке крахмалом, просушить, а затем проветрить не менее 1 ч при температуре от 15 до 25 °C и относительной влажности воздуха от 30 до 70 %, после этого их сложить размером примерно 220 ´ 300 мм и сформировать стопки высотой примерно 250 мм.

Высушенные простыни не гладить!

После сжатия рукой стопку из 16 простыней оборачивают сложенной вдвое 17-й простыней и скрепляют лентой для паровой стерилизации, шириной не более 25 мм.

Подготовленную упаковку хранят в помещении при температуре воздуха 15 - 25 °C и относительной влажности 30 - 70 %.

После каждого использования простыни разворачивают и высушивают и в последующем складывают опять в стопку. При многократном использовании стопка из простыней уплотняется. Если высота стопки из 17 простыней после сжатия рукой меньше 250 мм, все простыни стирают (примерно после 15-кратного использования), просушивают (не гладить!) и снова сформировывают стопу. Если масса тестовой упаковки из 17 простыней (без индикаторов) превышает 7,7 кг, простыни заменяют на новые. Кратность использования простыней в тестовой упаковке - 50 раз.

4.3. Биологический индикатор.

В Тест-ИБ используют биологический индикатор, соответствующий ГОСТ Р ИСО 11138-1 -00, на основе споровой формы культуры Bacillus stearothermophilus ВКМ В-718 с числом тест-микроорганизмов 10 6 .

4.4. Химические индикаторы паровой стерилизации.

При контроле удаления воздуха в Тест-ИХ допускается использовать только химические индикаторы, соответствующие техническим требованиям, приведенным в табл. , и разрешенные к применению в установленном порядке для контроля соблюдения условий внутри упаковок и изделий. Химические индикаторы должны достигать конечного состояния только после инактивации споровой формы культуры Bacillus stearothermophilus ВКМ В-718 с числом тест-микроорганизмов 10 6 .

Индикаторная метка химического индикатора должна иметь контрастную разницу в цвете в условиях гарантированного достижения и недостижения конечного состояния, что обеспечивает однозначную трактовку результатов.

Гарантированный срок хранения индикаторов должен быть не менее 12 мес.

Сохранность конечного цвета индикаторной метки после использования должна быть не менее 24 мес.

Таблица 2

Требования к химическим индикаторам паровой стерилизации, применяемым в Тест-ИХ

Тестовый цикл

Требования к химическим индикаторам

Гарантированные условия достижения конечного состояния в насыщенном паре

Гарантированные условия недостижения конечного состояния в насыщенном паре

Гарантированные условия недостижения конечного состояния в сухом воздухе

время, мин

120 +2 °C 45 мин

(126 ± 2) °C 30 мин

(132 ± 2) °C 20 мин

(121 ± 1) °C 20 мин

(126 ± 1) °C 10 мин

(134 ± 1) °C 5 мин

В указанных тестовых циклах для контроля условий паровой стерилизации могут быть использованы химические индикаторы с соответствующими характеристиками, разрешенные к применению для этих целей в установленном порядке.

5. Проведение контроля удаления воздуха с помощью Тест-ИБ и Тест-ИХ

5.1. Контроль удаления воздуха с помощью Тест-ИБ необходимо проводить периодически - один раз в три месяца - организациями, имеющими разрешение на данный вид деятельности в установленном порядке.

5.2. Контроль удаления воздуха с помощью Тест-ИХ необходимо проводить в качестве самоконтроля после смены операторов, обслуживающих стерилизатор, проведения профилактических работ, перевода работы стерилизатора на другую температуру стерилизации с периодичностью не реже одного раза в неделю (ГОСТ Р ИСО 13683 -00).

5.3. Перед использованием Тест-ИБ и/или Тест-ИХ проверяют дату окончания срока годности биологических индикаторов и/или химических индикаторов. Использовать просроченные индикаторы не допускается.

5.4. Подготовка тестов к испытанию.

5.4.1. Взвешивают общую массу 17 простыней, используемых в тестовой упаковке. При превышении массы выше 7,7 кг или занижении ниже 6,3 кг использование простыней не допускается.

Проводят замер высоты стопки из 17 простыней. При занижении высоты стопки менее 250 мм использование простыней не допускается. Требования к тестовой упаковке - в соответствии п. .

5.4.2. Берут верхнюю простыню из стопки, разворачивают, складывают в два слоя и застилают рабочий стол в соответствии с рис. . На застеленный простыней стол в середину по диагонали к простыне складывают стопку из 8 простыней в соответствии с рис. .

5.4.3. В геометрический центр верхней простыни (в Тест-ИХ) укладывают девять химических индикаторов нужной марки в соответствии с рис. и/или (в Тест-ИБ) пять биологических индикаторов в соответствии с рис. .

Химические индикаторы располагают в соответствии с рис. : один индикатор с индикаторной меткой в геометрическом центре простыни, 8 индикаторов вокруг геометрического центра образуют квадрат стороной 50 мм.

Биологические индикаторы располагают в соответствии с рис. : один индикатор в геометрическом центре простыни, 4 индикатора вокруг геометрического центра образуют квадрат стороной 50 мм.

5.4.4. Сверху на стопку из 8 простыней укладывают еще 8 простыней в соответствии с рис. . Все простыни в стопке выравнивают.

5.4.5. Сжимают стопку из 16 простыней сверху рукой и плотно заворачивают 17-й простыней, застеленной на столе в соответствии с рис. - . Складки заворачивающей простыни на каждом этапе фиксируют липкой лентой для паровой стерилизации.

5.5. Порядок проведения контроля.

5.5.1. Прогревают стерилизационную камеру на температуру тестового цикла, проведя холостой стерилизационный цикл с пустой камерой.

5.5.2. Открывают камеру стерилизатора, загружают в камеру тестовую контрольную упаковку в контрольную точку № 1 в соответствии с рис. или в наиболее холодную зону камеры, указанную изготовителем стерилизатора. Свободное пространство заполняют хлопчатобумажными изделиями, упакованными в пакеты или уложенными в стерилизационные коробки согласно правилам загрузки стерилизатора.

5.5.3. Тестовую упаковку размещают на металлической подставке (рис. ), при этом края и углы упаковки не должны касаться стенок стерилизационной камеры.

5.5.4. Закрывают дверцу стерилизатора и проводят полный тестовый цикл, включающий следующие этапы: удаление воздуха, стерилизационная выдержка и послестерилизационная сушка. Работу на стерилизаторе осуществляют в соответствии с инструкцией по эксплуатации.

5.5.5. По завершении тестового цикла вытаскивают тестовую упаковку из стерилизационной камеры, укладывают на упаковочный стол и разворачивают.

5.5.6. Биологические и/или химические индикаторы извлекают из тестовой упаковки.

6. Трактовка результатов контроля удаления воздуха
помощью Тест-ИБ и Тест-ИХ

6.1. Тест-ИБ. После окончания тестового цикла проводят инкубацию биологических индикаторов в соответствии с инструкцией по применению биологического индикатора конкретной марки и производителя. Результаты испытаний на полноту удаления воздуха становятся известны после окончания времени инкубации.

Отсутствие пророста (инактивации) биологических индикаторов указывает на удовлетворительное удаление воздуха и обеспечение достаточной микробиологической эффективности стерилизации. При этом эксплуатация стерилизатора разрешается.

Прорастание биологических индикаторов указывает на неудовлетворительное удаление воздуха и на недостаточную микробиологическую эффективность стерилизации. Эксплуатация стерилизатора не допускается.

6.2. Тест-ИХ. После извлечения химических индикаторов сравнивают цвет индикаторной метки с цветом эталона сравнения.

При удовлетворительном удалении воздуха цвет индикаторной метки химического индикатора достигает цвета эталона сравнения.

Если цвет индикаторной метки химического индикатора не достиг цвета эталона сравнения, то стерилизатор не обеспечивает необходимую эффективность стерилизации, причиной которой является неудовлетворительное удаление воздуха. При этом эксплуатация стерилизатора не допускается.

6.3. Изделия, использованные в тестовых циклах и подлежащие обеззараживанию в соответствии с СП 1.2.731-99 «Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности и гельминтами» и СП 1.3.1285-03 «Безопасность работы с микроорганизмами I - II групп патогенности (опасности)», будут считаться стерильными только после дополнительной обработки при соответствующих режимах обеззараживания.

6.4. Результаты испытания стерилизатора на удаление воздуха Тест-ИХ и Тест-ИБ записывают в отдельный журнал контроля работы стерилизаторов по форме 257/у, где регистрируют результаты проведения контроля на удаление воздуха. В журнал подклеивают все использованные химические индикаторы и бактериологическое заключение лаборатории по инкубации биологических индикаторов. В журнале указывают следующие данные: дату и время проведения испытаний, параметры тестового цикла, номер стерилизатора, загрузку камеры, заданные показания манометра, длительность выдержки, Ф., И., О. оператора, массу тестовой упаковки с точностью до 0,1 кг и высоту тестовой упаковки с точностью до 5 мм (до режима).

Журнал с результатами хранят в качестве документа архива в течение 12 мес. в лечебно-профилактических организациях и в течение 24 мес. в бактериологических лабораториях.

7. Действия персонала при неудовлетворительных результатах контроля удаления воздуха с помощью Тест-ИБ и/или Тест-ИХ

7.1. Эксплуатация стерилизатора не допускается.

7.2. Вызывают специалистов, ответственных за ремонт и профилактику стерилизационного оборудования.

7.3. Специалисты по ремонту и профилактике стерилизационного оборудования совместно с сотрудниками стерилизационного отделения проводят анализ причин неудовлетворительного результата контроля и устраняют причину.

7.4. После выяснения причин и их устранения проводят повторный контроль удаления воздуха с помощью Тест-ИХ и Тест-ИБ. Эксплуатация стерилизатора разрешается только после положительного прохождения тестов.

8. Меры предосторожности и утилизация индикаторов

8.1. Химические индикаторы, разрешенные к применению в установленном порядке, для контроля условий внутри упаковок и изделий медицинского назначения, при хранении и использовании не выделяют в окружающую среду токсичных веществ и не оказывают при непосредственном контакте вредного влияния на организм человека.

8.2. При работе с тестовой упаковкой и химическими индикаторами специальных мер по защите природной среды от вредных воздействий не требуется.

8.3. Отходы химических индикаторов подлежат утилизации в соответствии с инструкцией по применению индикатора конкретной марки и производителя.

8.4. Простыни из тестовой упаковки после прихода в негодность используют как ветошь.

8.5. Биологические индикаторы подвергают обеззараживанию в паровом стерилизаторе в режиме, указанном в инструкции по применению индикаторов, и утилизируют как бытовой мусор.

9. Библиографические данные

1. Федеральный закон «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения» от 30 марта 1999 г. № 52-ФЗ.

2. «Основы законодательства Российской Федерации об охране здоровья граждан» от 22 июля 1993 г.

3. Санитарные правила СП 1.2.036 -96 «Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I - IV групп патогенности».

4. Санитарные правила СП 1.2.731-99 «Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности и гельминтами».

5. Санитарно-эпидемиологические правила СП 1.3.1285-03 «Безопасность работы с микроорганизмами I - II групп патогенности (опасности)».

6. Методические указания МУ 287-113 «Методические указания по дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения» от 30 декабря 1998 г.

7. «Методические указания по контролю работы паровых и воздушных стерилизаторов» № 15/6-5 от 28 февраля 1991 г., утв. МЗ СССР.

8. ОСТ Р ИСО 11138-1-00. Стерилизация медицинской продукции. Биологические индикаторы. Часть 1. Технические требования.

9. ГОСТ Р ИСО 11138-3 -00. Стерилизация медицинской продукции. Биологические индикаторы. Часть 3. Биологические индикаторы для стерилизации влажным теплом.

10. ГОСТ Р ИСО 11140-1 -00. Стерилизация медицинской продукции. Химические индикаторы. Часть 1. Общие требования.

11. ГОСТ Р ИСО 13683 -00. Стерилизация медицинской продукции. Требования к валидации и текущему контролю. Стерилизация влажным теплом в медицинских учреждениях.

12. ГОСТ Р 51935 -02. Стерилизаторы. Паровые стерилизаторы. Большие стерилизаторы.

13. ИСО 11140-3. Стерилизация изделий медицинского назначения. Химические индикаторы. Часть 3. Проверка паропроницаемости с помощью составных и готовых пакетов для испытаний. 1997.

14. ИСО 11140-4. Стерилизация изделий медицинского назначения - химические индикаторы. Ч. 4. Индикаторы 2 класса для упаковок, тестирующих паропроницаемость. 2001.

Приложение 1

(обязательное)

Журнал контроля работы стерилизаторов воздушного, парового (автоклава)

Начат: «...» ........ 200... г. Окончен: «...» ........... 200... г.

Марка, номер стерилизатора

Стерилизуемые изделия

Время стерилизации, мин

Тест-контроль

наименование

упаковка

давление

температура

биологический

термический

химический

Методические указания
по контролю работы паровых и воздушных стерилизаторов

(утв. Главным эпидемиологическим управлением Минздрава СССР
от 28 февраля 1991 г. № 15/6-5)

1. Общие положения

Самоконтроль работы стерилизатора проводят при каждой загрузке аппарата.

ОСТ 42-21-2-85 .

Отклонения в показаниях максимальных термометров допускаются в пределах, регламентированных ОСТ 42-21-2-85 .

2.5.3. Хронометраж цикла стерилизации проводят аналогично п. .

Методика самоконтроля паровых стерилизаторов с использованием химических тестов изложена в п. .

Работу воздушного стерилизатора прекращают через 30 минут стерилизационной выдержки.

Оценку показаний максимальных термометров проводят аналогично п. .

Методика самоконтроля работы воздушных стерилизаторов с использованием химических тестов изложена в п. .

3.3.5. Самоконтроль работы паровых и воздушных стерилизаторов с использованием химических тестов.

Рецептуры химических тестов для контроля температурных параметров режимов работы паровых стерилизаторов

№ рецептуры	Наименование составных частей	Цвет, форма кристаллов, запах		Количество компонента, г
№ рецептуры	Наименование составных частей	Цвет, форма кристаллов, запах		Количество компонента, г	110 + 2	120 + 2	132 ± 2

	Антипирин 1	Бесцветные кристаллы или белый порошок без запаха	ГФ X 2 , с. 65	99,9 ± 0,01
	Краситель 4 Фуксин кислый или Феноловый красный или Бромтимоловый синий или Генциано-фиолетовый		ТУ 6-09-3803-82	0,1 ± 0,01
			ТУ 6-09-5170-84
			ТУ 6-09-2086-77
	Резорцин	Белый или со слабым желтоватым оттенком кристаллический порошок со слабым характерным запахом	ГФ X, cm. 577	99,9 ± 0,01
	Краситель			0,1 ± 0,01
	Сера элементарная 5	Желтые кристаллы	ТУ 6-09-2546-77	100,0
	Кислота бензойная		ГФ X, с. 9	95,24 + 0,01
	Краситель			4,76 + 0,01
	Кислота бензойная	Бесцветные игольчатые кристаллы или белый порошок		99,9 ± 0,01
	Кислота бензойная	Бесцветные игольчатые кристаллы или белый порошок		99,9 ± 0,01
	Краситель			0,1 ± 0,01
	Д(+)-Манноза	Бесцветные кристаллы в виде ромбических призм	ТУ 6-09-07-666-76	99,9 ± 0,01
	Краситель			0,1 ± 0,01
	Никотинамид	Белый кристаллический порошок со слабым запахом	ГФ X, с. 452	99,9 ± 0,01
	Никотинамид	Белый кристаллический порошок со слабым запахом	ТУ 6-09-08-852-82	99,9 ± 0,01
	Краситель			0,1 ± 0,01
	Мочевина	Бесцветные кристаллы		95,24 ± 0,01
	Краситель			4,76 ± 0,01

Примечание : 1 - относится к сильнодействующим лекарственным средствам, применение и хранение которых должно проводиться с предосторожностью: хранение в закрытых шкафах, в сухом помещении.

2 - ГФ X - Государственная фармакопея СССР, X издание.

3 - "+" - температурный параметр, для контроля которого используют химическое соединение.

4 - используют любой из красителей, перечисленных в рецептуре 1,

5 - при использовании серы в качестве химического теста добавление красителя нецелесообразно, так как при плавлении вещества не происходит его смешение с красителем.

Химические тесты для контроля температурных параметров режимов работы воздушных стерилизаторов

№ п/п	Наименование химического соединения	Цвет, форма кристаллов, запах	Нормативно-техническая документация	Количество элемента, г	Температурный параметр, подлежащий контролю, °С

	Левомицетин* 2	Белый или белый со слабым желто-зеленым оттенком кристаллический порошок без запаха	ГФ Х 3 , с. 371
	Кислота винная	Порошок белого цвета или прозрачные бесцветные кристаллы		100,0

	Гидрохинон	Бесцветные или светло-серые серебристые кристаллы		100,0
	Тиомочевина	Блестящие бесцветные кристаллы		100,0

Примечание:

1 - В состав химических тестов, используемых для контроля работы воздушных стерилизаторов, краситель не добавляют, т.к. указанные химические соединения изменяют свой цвет при достижении температуры плавления.

2 - Относится к сильнодействующим лекарственным средствам, применение и хранение которых должно проводиться с предосторожностью: хранение в закрытых шкафах, в сухом помещении.

3 - ГФ X - Государственная Фармакопея СССР X издание.

4 - "+" -температурный параметр, для контроля которого используют химическое соединение.

При обнаружении неудовлетворительных результатов химического контроля поступают, как указано в п. .

Термоиндикаторные краски для контроля параметров режимов работы воздушного стерилизатора при температуре °С, время выдержки - 60 минут

Марка термоиндикаторной краски	Минимально допустимая температура стерилизации, °С	Цвет краски		Характеристика термоиндикаторной краски
Марка термоиндикаторной краски	Минимально допустимая температура стерилизации, °С	исходный	после воздействия	Характеристика термоиндикаторной краски
ТИК 29		светло-розовый	темно-коричневый	Свидетель достижения минимально допустимой температуры 170 °С
ТИК 6		светло-зеленый	коричневый	Показатель длительности поддержания температуры 170 °С в течение 15 - 20 минут

Примечание : Краски изготавливает Рижский лакокрасочный завод. Адрес завода: 226007, г. Рига, ул. Даугавпилс, 63/65.

3.4.6. Пронумерованные термохимические индикаторы размещают в контрольные точки воздушных стерилизаторов в соответствии с приложением (приклеивают или прикрепляют на пакеты с контрольными тестами или на упаковку стерилизуемых изделий).

3.4.8. При обнаружении неудовлетворительных результатов термохимических индикаторов поступают, как указано в п. .

4. Бактериологический метод контроля

4.2. Бактериологический метод контроля работы стерилизаторов осуществляют с помощью биотестов.

5. Показатели качества работы стерилизаторов

Показания максимальных термометров;

Изменение исходного состояния химических тестов (агрегатное состояние и цвет);

Изменение цвета термохимических индикаторов;

Отсутствие роста тест-культур в биотесте при культивировании после стерилизации.

6. Причины неудовлетворительных результатов контроля работы паровых и воздушных стерилизаторов

Неполное удаление воздуха из камеры парового стерилизатора перед стерилизацией;

Избыточную, неравномерную или неправильную загрузку стерилизационной камеры;

Нарушение режима стерилизации;

Использование упаковочного материала, не предусмотренного ОСТ 42-21-2-85 -металлические пеналы (воздушная стерилизация), клеенка (паровая стерилизация);

Нарушение режима вентиляции (проникновение "загрязненного" воздуха через фильтр аппарата).

Приложение 1

Емкость камеры стерилизатора, (тип аппарата, дм 3)	Число контрольных точек
		Описание
до 100		для стерилизаторов прямоугольных;
		т. 1 - у загрузочной двери;

свыше 100 до 750 включительно		для стерилизаторов круглых вертикальных;
		т. 1 - в верхней части камеры;
		т. 2 - в нижней части камеры;
свыше 750		для стерилизаторов круглых горизонтальных;
		т. 1 - у загрузочной двери;
		т. 2 - у противоположной стенки (разгрузочной двери);
		т. 3 - т. 13 - в центре стерилизационных коробок или внутри стерилизуемых упаковок, размещенных на разных уровнях, против часовой стрелки.

Примечание : контрольные точки 1 и 2 находятся в стерилизационной камере вне стерилизуемых изделий.

Приложение 2

Емкость камеры стерилизатора, тип аппарата, дм 3	Число контрольных точек	Расположение контрольных точек
Емкость камеры стерилизатора, тип аппарата, дм 3	Число контрольных точек	Описание	Схема
до 80		т. 1 - в центре камеры, т. 2, т. 3 - в нижней части камеры: справа (т. 2) и слева (т. 3) на одинаковом удалении от двери и задней стенки, т. 4, т. 5 - в нижней части камеры: справа (т. 4) и слева (т. 5) у двери
свыше 80 однокамерные		т. 1, т. 2, т. 3 - в центре камеры на трех уровнях сверху вниз, т. 4 - т. 15 - по углам на трех уровнях (т. 4 - т. 7 - низ, т. 8 - т. 11 - середина, т. 12 - т. 15 - верх), размещая против часовой стрелки
свыше 80 двухкамерные		аналогичным образом для каждой камеры

Примечание : контрольные тесты помещают на расстоянии не менее 5 см от стенок стерилизационной камеры.

Приложение 3

Давление, МПа	(кгс/см 2)	Температура, °С
0,00		99,1
0,05		110,8
0,06		112,7
0,07		114,6
0,08		116,3
0,09		118,0
0,10		119,6
0,11		121,2
0,12		122,7
0,13		124,1
0,14		125,1
0,15		126,8
0,16		128,1
0,17		129,3
0,18		130,6
0,19		131,8
0,20		132,9
0,21		134,0
0,22		135,1
0,23		136,1
0,24		137,2
0,25		138,2

Приложение 4

Изготовление химических тестов проводит специально подготовленный персонал.

Изготовление химического теста включает в себя следующие операции:

1. Взвешивание компонентов химического теста.

2. Приготовление состава химического теста.

3. Нарезка заготовок стеклянных трубок.

4. Запайка с одного конца стеклянных трубок.

5. Заполнение составом химического теста стеклянных трубок.

6. Запайка стеклянных трубок со второго конца.

7. Контроль линейных размеров химического теста и его герметичности.

8. Упаковка химического теста.

Взвешивание компонентов осуществляют на весах лабораторных общего назначения 4-го класса точности по ГОСТ 24104-88 с наибольшими пределами взвешивания 200 г. Допускаемая погрешность взвешивания 0,01 г. В случае наличия комкования используемые вещества предварительно размельчают и просеивают через сито с проволочной сеткой.

Процесс приготовления состава химического теста состоит в перемешивании

химического соединения с красителем (или без него) в соответствии с данными таблиц и раздела 3 методических указаний. Приготовление осуществляют в емкости из нержавеющей стали или покрытой эмалью, или фарфоровой ступке. Перемешивание проводят вручную в течение 10 - 30 минут (в зависимости от объема емкости) до получения однородной по окраске смеси или в смесителе, который представляет собой емкость из нержавеющей стали или покрытой эмалью, снабженную мешалкой с частотой вращения 40 - 70 об/мин. В этом случае вначале загружают половину необходимого количества соединения (например, бензойной кислоты), а затем все количество красителя (например, фуксина) и после этого вторую половину бензойной кислоты. Полученную смесь тщательно перемешивают не менее 30 минут до получения однородной по окраске смеси.

Нарезку заготовок стеклянных трубок начинают с нанесения надреза на трубке надфилем, напильником с металлической насечкой или специальным ножом из высокоуглеродистой стали или победита. Надрез производят без нажима, перпендикулярно оси трубки на 1/6 - 1/5 части длины ее окружности. Затем надрез слегка смачивают водой, трубку обертывают куском мягкой, но плотной ткани, берут двумя руками так, чтобы большие пальцы упирались в нее с противоположной надрезу стороны и стараются легким, но резким движением одновременно растянуть и согнуть трубку в месте надреза.

Полученные заготовки стеклянных трубок запаивают с одного конца в пламени газовой или жидкостной горелки.*

Заполнение составом химического теста стеклянных трубок производят методом уплотнения на 1/2 - 1/3 ее высоты. Рабочее место заполнения составом химического теста стеклянных трубок должно быть оснащено поддонами (пластмассовым или металлическим), куда попадает излишний состав теста при заполнении им стеклянных трубок. На рабочем месте заполнения стеклянных трубок составом химического теста не должно быть течи воды или парения.

Заполненные стеклянные трубки запаивают со второго конца в пламени газовой или жидкостной горелки.

После запайки проводят метрический контроль размеров стеклянной трубки с помощью штангенциркуля с ценой деления 0,1 мм или с помощью измерительной металлической линейки с ценой деления 1 мм. Для достижения стандартности тестов стенки трубок должны быть одинаковой толщины, длина трубок 45 ± 5 мм, наружный диаметр 4 ± 1 мм.

Перед упаковкой проводят сплошной контроль герметичности химических тестов, который осуществляют опусканием тестов в воду на 4 - 5 минут. Тесты с намокшим составом отбраковывают.

После проведения контроля на герметичность химические тесты в количестве 3050 штук заворачивают в оберточную или упаковочную бумагу. К каждой такой упаковке прикладывают упаковочный лист с указанием обозначения химического теста, срока годности и количества единиц в упаковке. Срок годности химического теста определяют по сроку годности химического соединения, который указан на этикетке.

Исходные химические вещества следует хранить в местах, недоступных для общего пользования, в герметичной таре, в темном сухом прохладном помещении.

Лекарственные средства списка Б должны храниться в отдельных запирающихся шкафах.

Химические тесты хранят в упаковке в сухих помещениях.

______________

* Для укупорки тестов нельзя использовать ватно-марлевые и резиновые пробки, так как они не обеспечивают герметичности теста, что приводит к растворению состава химических тестов в конденсате (контроль работы паровых стерилизаторов) и контакту стерилизуемых изделий с веществами, образующимися при нагревании состава химических тестов (контроль работы воздушных стерилизаторов).

Меры предосторожности

Рекомендованные химические соединения по предельно допустимым концентрациям в воздухе рабочей зоны относятся ко II - IV классу опасности (ГОСТ 12.1.007-76 "Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности").

Указанные соединения характеризуются общетоксическим и раздражающим действием на организм.

Работа с этими химическими соединениями требует изолированного помещения с эффективной общеобменной приточно-вытяжной вентиляцией, в том числе наличия местных вытяжных устройств (вытяжного шкафа).

К работе допускаются лица не моложе 18 лет, прошедшие соответствующий инструктаж по технике безопасности и мерам предосторожности при работе с химическими соединениями (ответственный за инструктаж - лицо, специально назначенное приказом администрации).

Персонал, изготавливающий химические тесты, проходит предварительный и периодический (раз в год) медицинские осмотры. Лица с повышенной чувствительностью к применяемым химическим соединениям, а также имеющие противопоказания по состоянию здоровья в соответствии с приказом МЗ СССР от 29 сентября 1989 г. № 555 "О совершенствовании системы медицинских осмотров трудящихся и водителей индивидуальных транспортных средств к работе не допускаются.

При изготовлении и запайке химических тестов необходимо не допускать рассыпания и пыления веществ. Следует избегать попадания их на кожу и слизистые оболочки. Все работы необходимо проводить в спецодежде (хлопчатобумажных халатах и резиновых перчатках). По окончании работы руки следует вымыть мылом и смазать кремом.

При отсутствии вытяжного шкафа работы следует проводить с использованием средств индивидуальной защиты органов дыхания (фильтрующий универсальный респиратор марки РУ-60 М или РПГ-67 с противогазовым патроном марки 4 "А"), защитных очков марок ПО-2, ПО-3, а также резиновых перчаток.

Первая помощь при случайном отравлении

При несоблюдении мер предосторожности у персонала могут возникнуть признаки отравления.

В этом случае пострадавшего следует вывести из рабочего помещения на свежий воздух, снять загрязненную спецодежду, обеспечить покой и согревание. При необходимости его следует направить в медпункт, для оказания врачебной помощи.

При попадании веществ на кожу их следует осторожно удалить ватным тампоном (не втирая и не размазывая), после чего место загрязнения обмыть струей воды с мылом в течение 5 - 10 минут.

При попадании любого вещества в глаза их следует немедленно обильно промыть водой в течение 5 - 10 минут и закапать 1 - 2 капли 30 % раствора альбуцида, а при болезненности - 1 - 2 капли 2 % раствора новокаина.

После этого выпить небольшими глотками теплое молоко с содой или боржоми.

При болезненном кашле следует использовать средства против кашля (таблетки от кашля, мукалтин).

При случайном проглатывании химических соединений необходимо выпить несколько стаканов воды или раствор марганцевокислого калия розового цвета (1:5000, 1:10000) и затем вызвать рвоту механическим раздражением корня языка. После рвоты рекомендуется обильное питье теплой воды или чая, применение взвеси активированного угля (2 столовые ложки на литр воды).

При сохранении признаков отравления следует обратиться за специальной медицинской помощью.

Приложение 5

1. Приготовление биотестов осуществляют в боксе, специально оборудованной комнате или шкафу с ламинарным потоком воздуха с соблюдением асептики.

2. Для проведения работы ежедневно помещения боксов и предбоксника подвергают тщательной обработке. Стены, пол, поверхности инвентаря протирают 3 % раствором перекиси водорода с 0,5 % моющего средства (Триас-А, Астра, Лотос). В случае обнаружения в воздухе грибов или споровых форм микроорганизмов влажную уборку проводят 6 % раствором перекиси водорода с 0,5 % выше перечисленных моющих средств.

Внутреннюю поверхность настольного бокса обрабатывают так же, как и помещение бокса. Через 45 - 60 минут после обработки в бокс вносят все необходимые для работы материалы, инструменты, кроме образцов изделия.

Перед внесением материалов в настольном боксе включают вентиляцию на время, достаточное для обеспечения полного обмена воздуха в нем.

За 1,5 - 2 часа до начала работы в боксе и предбокснике на 1 - 1,5 часа включают бактерицидные лампы.

Инструменты, посуду и спецодежду, используемые в работе, предварительно стерилизуют в паровом стерилизаторе. Металлические, стеклянные и тканевые изделия обрабатывают при следующем режиме: температура 132 ± 2 °С, время стерилизационной выдержки 20 минут; изделия из резины (перчатки и т.д.) - при температуре 120 + 2 °С в течение 45 минут.

Перед входом в бокс работники лаборатории тщательно моют руки теплой водой с мылом и щеткой, вытирают стерильным полотенцем, надевают в предбокснике на ноги бахилы, стерильные халаты, 4-слойные маски, шапочки, на руки - стерильные перчатки.

В процессе посева в боксе регулярно проверяют обсемененность воздуха. Для этого на рабочий стол ставят 2 чашки с питательным агаром, открывая их на 15 минут, затем чашки помещают в термостат при температуре 37 °С на 48 часов. Допускается рост не более трех колоний неспорообразующих сапрофитов.

В случае роста на чашках более 3 колоний проведение дальнейших работ в данном боксе запрещается, в нем дополнительно проводят тщательную обработку 6 % раствором перекиси водорода с 0,5 % моющих средств.

Приготовление растворов комплекса перекиси водорода с моющими средствами Триас-А, Астра, Лотос проводят в соответствии с расчетом, приведенным в таблице.

Состав рабочего раствора		Количество пергидроля, воды, моющего средства, необходимое для приготовления 1 л раствора
Концентрация		Пергидроля в зависимости от концентрации в нем перекиси водорода		Воды, мл	Моющего средства, г
перекиси водорода	моющего средства	концентрация перекиси водорода в пергидроле	количество пергидроля в мл на 1 л раствора	Воды, мл	Моющего средства, г
		30,0	100,0
		31,0
		32,0
		33,0
		30,0
		31,0
		32,0
		33,0

При приготовлении раствора пергидроль приливают к раствору моющего средства.

При приготовлении растворов перекиси водорода и работе с 6 % растворами руки защищают резиновыми перчатками, а глаза - герметичными очками. При попадании пергидроля на кожу или в глаза их немедленно промывают обильным количеством водопроводной воды. При несоблюдении указанных правил техники безопасности могут развиваться дерматиты и конъюнктивиты. Запасы препарата хранят в местах, недоступных для общего пользования, в темной посуде, желательно, при температуре +4 °С.

3. Методика приготовления биотестов включает следующие этапы: подготовку тест-культуры, подготовку носителей (изготовление, мойка, стерилизация), обсеменение и высушивание носителей, упаковка биотестов, определение фактической плотности обсеменения носителей, контроль устойчивости тест-культуры на носителе, хранение приготовленных биотестов.

4. Тест-культуры Bacillus stearothermophilus BКM В-718 (контроль работы паровых стерилизаторов) и Bacillus licheniformis штамм G (контроль воздушных стерилизаторов) хранятся в музее культур ВНИИ профилактической токсикологии и дезинфекции МЗ СССР.

Адрес института: 117246, г. Москва, Научный проезд, д. 18.

5. Согласно "Положению о порядке учета, хранения, обращения, отпуска и пересылки культур бактерий, вирусов, риккетсий, грибов, простейших, микоплазм, бактериальных токсинов, ядов биологического происхождения" МЗ СССР, 1980 г., отпуск тест-культур производится по официальному требованию за подписью руководителя учреждения, скрепленному печатью учреждения, запрашивающего тест-культуру.

6. Биотесты приготавливают партиями. Партией считают определенное количество биотестов, приготовленных из исходной культуры в условиях производства, считающихся одинаковыми (получение спор на одной партии питательной среды, одновременное высушивание носителей и т.д.).

7. Методика приготовления питательных сред для получения спор тест-культур изложена в приложении .

8. Биотесты, используемые для контроля работы паровых и воздушных стерилизаторов, должны иметь стандартизированные показатели устойчивости тест-культур: время выживания тест-культур на носителе.

8.1. Устойчивость тест-культур должна быть воспроизводимой характеристикой от даты приготовления до истечения срока годности биотеста.

8.2.1. Из каждой партии биотестов методом случайной выборки отбирают две группы биотестов в количестве не менее 10 образцов каждая.

8.2.2. Для определения показателей устойчивости одну группу биотестов подвергают действию стерилизующего агента на соответствие показателю времени выживания спор тест-культуры на 100 % исследуемых носителей, другую - времени гибели спор тест-культуры на 100 % исследуемых носителей.

8.2.3. При получении неудовлетворительных результатов испытаний биотестов (п. ) проводят повторный контроль удвоенного количества биотестов от той же партии. Результаты повторных испытаний распространяют на всю партию.

8.3. Показатели устойчивости тест-культур в соответствии с приложением , п. 19 ( , п. 19) обеспечивают надежный контроль работы паровых и воздушных стерилизаторов на режимы стерилизации изделий медицинского назначения.

9. Биотесты маркируют. Маркировка включает следующие данные: наименование тест-культуры; метод стерилизации, который подлежит контролю; номер партии; число спор на носителе; показатели устойчивости тест-культур; срок годности; условия хранения; наименование организации-изготовителя.

К наборам биотестов следует прилагать методику культивирования тест-культур после стерилизации и методику обеззараживания инфицированного материала.

10. Биотесты хранят при комнатной температуре. Срок хранения 2 года от даты изготовления. По истечении этого срока проводят повторно контроль устойчивости.

11. Для культивирования тест-культур после определения устойчивости к соответствующему стерилизующему агенту (приложения , п. 19) и после бактериологического контроля работы стерилизаторов (раздел ) в бактериологической лаборатории с соблюдением правил асептических условий биотесты вынимают из упаковки. Во флаконы вносят 1 мл питательной среды и закрывают стерильными резиновыми пробками (№ 7, 5) с целью предупреждения высыхания питательной среды (в случае отсутствия резиновых пробок во флаконы вносят 5 мл питательной среды и закрывают стерильными ватно-марлевыми пробками), диски из фильтровальной бумаги и чашечки из фольги пинцетом, который обжигают в пламени, помещают в бактериологические пробирки с 5 мл питательной среды.

12. Методика приготовления питательных сред для культивирования тест-культур после стерилизации изложена в приложении .

13. Учет результатов бактериологического контроля проводят путем ежедневного визуального осмотра всех биотестов с питательной средой:

13.1. при использовании бульона Хоттингера, питательного бульона сухого, мясопептонного бульона, бульона из перевара кровяных сгустков, сухой питательной среды для контроля стерильности рост тест-культур определяют по помутнению питательной среды;

13.2. при использовании полусинтетической среды с индикатором феноловым красным рост тест-культур определяют по изменению красного цвета среды (рН 7,7 ± 0,1) на желто-оранжевый (рН 6,7 ± 0,1) за счет разложения глюкозы с образованием кислоты, под действием которой происходит изменение цвета индикатора. При использовании этой питательной среды необходимо обязательно использовать резиновые пробки (стерильные). Флаконы или бактериологические пробирки должны быть плотно закрыты резиновыми пробками (№ 7, 5 и № 12, 5 соответственно) с целью предупреждения ложного отрицательного результата (при наличии роста культуры отсутствует изменение цвета питательной среды - это происходит в результате улетучивания углекислого газа, образующегося при разложении глюкозы).

Биотесты считают стерильными, если помутнение (изменение цвета) питательной среды отсутствует, что указывает на гибель спор тест-культуры, т.е. на эффективность работы стерилизатора.

Предварительное заключение о неудовлетворительном результате контроля делают по помутнению (изменению цвета) питательной среды.

14. Окончательный ответ выдают после высева из пробирок (флаконов) с признаками роста и сравнения выделенной культуры с контролем. Рост других культур микроорганизмов относят за счет вторичного обсеменения.

15. В качестве контроля используют биотест, который не подвергают действию стерилизующего агента, и питательную среду, которую применяют для культивирования тест-культур после стерилизации. Контрольные тесты культивируют аналогично биотестам, которые подвергали действию стерилизующего агента.

16. При отсутствии роста тест-культур в контрольном биотесте, который не подвергали действию стерилизующего агента, устанавливают причины (нежизнеспособность тест-культуры, нарушение методики приготовления биотестов, питательных сред, культивирования). Результаты бактериологического исследования аннулируют и повторяют контроль работы аппарата.

17. После регистрации результатов бактериологического исследования лабораторную посуду (чашки Петри, пробирки, пипетки), пробки, посевы обеззараживают в паровых стерилизаторах под давлением при температуре (126 ± 2) °С (0,15 МПа (1,5 кгс/см 2), время выдержки 120 минут.

18. При обнаружении неудовлетворительных результатов бактериологического контроля работы стерилизатора бактериологическая лаборатория извещает об этом по телефону руководителя медицинского учреждения и направляет заключение о результате бактериологического контроля.

Приложение 6

1. Штамм бактерий B. stearothermophilus BКM В-718 получен из Всесоюзной коллекции микроорганизмов Института биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР.

Подвижная термофильная палочка, по Граму окрашивается положительно, культивируется при температуре 55 ± 1 °С, исключающей развитие других широко распространенных микроорганизмов. Споры овальные, расположенные центрально. На мясопептонном бульоне (рН 7,3 ± 0,1) через 24 часа образует помутнение среды; на мясопептонном агаре (рН 7,3 ± 0,1) - слабо выпуклые колонии диаметром 2 - 4 мм с ровным краем. Штамм непатогенен для человека и животных.

2. Ампулу с лиофилизированной культурой B. stearothermophilus BKM В-718 вскрывают в асептических условиях следующим образом: тампоном ваты, смоченным этиловым спиртом, обрабатывают поверхность ампулы. Затем, держа ампулу в левой руке, нагревают ее запаянный конец в пламени. Чтобы на ампуле образовалась трещина, к накаленному концу ампулы прикладывают ватную пробку, смоченную стерильной водой. После этого металлическим инструментом (скальпель, пинцет) откалывают по трещине конец ампулы. Стерильной пастеровской пипеткой в ампулу вливают 0,2 мл стерильной водопроводной воды и оставляют в течение 30 минут при комнатной температуре. Суспензию отсасывают стерильной пастеровской пипеткой и переносят по 1 - 2 капли в две пробирки с бульоном (бульон Хоттингера, питательный бульон сухой, мясопептонный бульон), содержащим 0,5 % глюкозы.

Посевы инкубируют при температуре 55 ± 1 °С в течение 24 часов. При росте культуры происходит помутнение питательной среды.

3. Суточную бульонную культуру бактериологической петлей или пастеровской пипеткой (по 1 - 2 капли) пересевают в 10 - 20 пробирок на скошенную питательную среду (агар Хоттингера, питательный агар сухой, мясопептонный агар).

Посевы инкубируют при температуре 55 ± 1 °С в течение 24 часов.

4. Для получения спор культуру, выращенную на твердой питательной среде (п. 3), смывают 5 мл стерильной водопроводной воды и переносят во флаконы вместимостью 250 - 500 мл (10 - 20 штук в зависимости от потребности в суспензии спор), содержащие соответственно 100 - 200 мл скошенного картофельно-пептонного агара. Для обсеменения каждого флакона в зависимости от его вместимости используют суспензию, смытую с 1 - 2 пробирок соответственно. Взвесь покачиванием флакона равномерно распределяют по поверхности среды. Флаконы закрывают ватно-марлевыми пробками с бумажными колпачками и инкубируют при температуре 55 ± 1 °С в течение 10 - 12 суток в наклонном положении (под углом 45°) агаром вверх. Для создания достаточной влажности в термостат помещают открытые емкости с водой (до 2 л на термостат вместимостью 80 л).

5. На 7, 10 и 12 сутки культуру проверяют на интенсивность спорообразования (выборочно 2 - 3 флакона). Культуру забирают петлей с верхнего, среднего и нижнего участков агара, все три пробы растирают вместе на одном предметном стекле, распределяя тонким слоем. Мазок фиксируют, окрашивают по Граму или генцианвиолетом (по Синеву). Окрашенные препараты промывают водопроводной водой, подсушивают и микроскопируют с иммерсионной системой - споры имеют вид неокрашенных пустот, находящихся внутри клеток. Исследуют 3 - 5 полей зрения, подсчитывают количество спор, выражая в процентах. Достаточным количеством считают 80 - 90 % спор в поле зрения от общего числа клеток.

7. Для удаления вегетативных клеток и получения чистых спор суспензию прогревают при температуре от 65 до 70 °С в течение 30 минут в водяной бане (экспозиция с момента достижения температуры на термометре, опущенном в контрольную аналогичную емкость с таким же количеством воды), центрифугируют в стерильных центрифужных пробирках, закрытых ватно-марлевыми пробками, с частотой вращения 33,33 с -1 (2000 об/мин) в течение 15 минут. Надосадочную жидкость осторожно удаляют, а осадок трехкратно промывают стерильной дистиллированной водой, чередуя с центрифугированием, после чего споры суспендируют в стерильной дистиллированной воде в соотношении 1:1 по объему.

8. Суспензию спор хранят в холодильнике при температуре 4 °С в стерильных пробирках, закрытых ватно-марлевыми пробками с резиновыми колпачками. Срок хранения - 2 года.

9. Для получения культур производят высев из пробирок с суспензией, заложенной на хранение, в пробирки с бульоном (бульон Хоттингера, питательный бульон сухой, мясопептонный бульон), содержащим 0,5 % глюкозы (2 пробирки), и далее получают споры по описанной выше методике (приложение, п. 2 - 7).

10. Чистоту культур на всех этапах культивирования контролируют высевом на чашки Петри с агаром (агар Хоттингера, питательный агар сухой, мясопептонный агар).

11. Для определения титра жизнеспособных спор 0,1 мл исходной суспензии пипеткой переносят в пробирку, содержащую 0,9 мл стерильной дистиллированной воды (разведение 10 -1). Подобным образом последовательно получают десятикратные разведения исходной суспензии, меняя пипетку для каждого разведения. Из трех последовательных десятикратных разведений исходной суспензии (предел разведения зависит от титра полученных спор - ориентировочно от 10 -5 до 10 -7) производят высев по 0,1 мл суспензии на поверхность трех чашек Петри с агаром (агар Хоттингера, сухой питательный агар).

Чашки Петри инкубируют при температуре 55 ± 1 °С в течение 48 часов, после чего производят подсчет выросших колоний.

12. Титр жизнеспособных спор в исходной суспензии определяют как среднее арифметическое числа колоний с учетом разведения исходной суспензии и объема пробы для посева.

Пример расчетов . Предположим, что при посеве на три чашки Петри с агаром суспензии в разведении 1:100000 (10 -5 подсчитано 140, 110 и 134 колонии. Аналогичные высевы из разведений 1:1000000 (10 -6) привели к образованию 12, 14 и 16 колоний; 1:10000000 (10 -7) - 5, 3 и 7 колоний.

Вычисляем общее число колоний, найденных во всех трех чашках Петри соответствующих разведений:

1:100000 (10 -5) 140 + 110 + 130 = 348

1:1000000 (10 -6) 12 + 14 + 16 = 42

1:10000000 (10 -7) 5 + 3 + 7 = 15

Среднее число колоний на чашках составит для разведения

1:100000 (10 -5) 384: 3 = 128

1:1000000 (10 -6) 42: 3 = 14

1:10000000 (10 -7) 15: 3 = 5

Из расчета посевной дозы (0,1 мл на каждую чашку) вычисляем титр жизнеспособных спор в 1 мл исходной суспензии с учетом разведений, далее находим средние арифметические числа колоний:

128 × 10 × 10 5 = 12,8 × 10 7 .

14 × 10 × 10 6 = 14,0 × 10 7 .

5 × 10 × 10 7 = 50,0 × 10 7 .

Таким образом, титр исходной суспензии составит:

(12,8 + 14,0 + 50,0) × 10 7: 3 = 25,6 × 10 7 = 2,5 × 10 8 спор в 1 мл.

13. В качестве носителей тест-культуры B. stearothermophilus ВКМ В-718 используют флаконы или чашечки из алюминиевой фольги. Флаконы тщательно моют, закрывают ватно-марлевыми пробками. Из алюминиевой фольги вырезают диски размером 14 мм, неоточенной стороной карандаша в дисках делают вдавление - луночку.

14. Подготовленные носители стерилизуют паровым методом при температуре 120 + 2 °С, время стерилизационной выдержки 45 минут или воздушным методом при температуре °C, время стерилизационной выдержки 60 минут в упаковке из бумаги (чашечки из фольги раскладывают в чашки Петри).

15. Стерильные носители с помощью дозатора пипеточного (ТУ 64-1-3329-81) обсеменяют суспензией спор тест-культуры B.stearothermophilus ВКМ В-718 из расчета 5 × 10 5 - 5 × 10 6 спор на носитель, что достигается нанесением на каждый носитель 0,02 мл суспензии спор в дистиллированной воде титром 2,5 × 10 7 - 2,5 × 10 8 спор в 1 мл.

17. Каждый биотест закладывают в пакет из упаковочной бумаги (флаконы) или заворачивают в бумагу упаковочную по типу порошка (чашечки из алюминиевой фольги), раскладывают в полиэтиленовые пакеты, маркируют и запаивают.

18. Для определения фактической плотности обсеменения используют не менее трех биотестов от каждой партии. Во флаконы вносят 1,0 мл стерильной дистиллированной воды (чашечки из алюминиевой фольги отмывают в широкогорлых пробирках с бусами в 10 мл) и встряхивают в течение 10 минут на аппарате для встряхивания жидкостей с последующим высевом на поверхность трех чашек Петри с агаром (агар Хоттингера, питательный агар сухой) по 0,1 мл суспензии из трех последовательных десятикратных разведений исходной суспензии. Среднее число спор в биотесте должно быть в соответствии с приложением , п. 15.

19. Определение устойчивости спор тест-культуры B. stearothermophilus BКM В-718 к действию водяного насыщенного пара под избыточным давлением проводят при температуре 120 + 2 °С.

Биотесты в упаковочной бумаге помещают в стерилизационной коробке в камеру парового стерилизатора (ВК-75). После набора давления в водопаровой камере (0,11 ± 0,1) МПа (1,1 ± 0,1 кгс/см 2) проводят продувку парового стерилизатора (вытеснение воздуха паром из камеры парового стерилизатора) в течение 10 минут (при открытом спускном кране и давление в стерилизационной камере от 0,01 до 0,02 МПа (от 0,1 до 0,2 кгс/см 2). После продувки доводят давление пара в стерилизационной камере до 0,11 ± 0,01 МПа (1,1 ± 0,1 кгс/см 2), температура 120 + 2 °С и через 5 минут времени выдержки (время выживания спор тест-культуры на носителе) с момента установления давления спускают пар. Для уменьшения времени воздействия пара до и после экспозиции подъем давления проводят максимум в течение 8 минут, спуск - в течение 3 минут.

Аналогичное исследование проводят в течение 15 минут времени выдержки (время гибели спор тест-культуры на носителе).

Контроль температуры осуществляют максимальными термометрами.

По окончании времени выдержки биотесты вынимают из стерилизатора. Культивирование тест-культуры B.stearothermophilus BКM В-718 осуществляют в бактериологической лаборатории в соответствии с приложением , п. 11 - 19.

Таблица

Показатели устойчивости тест-культуры B. stearothermophilus ВКМ В-718 на носителе к действию водяного насыщенного пара под избыточным давлением

Наименование показателя

Норма

Метод исследования

Устойчивость спор тест-культуры B. stearothermophilus ВКМ В-718 на носителе к действию водяного насыщенного пара под избыточным давлением при температуре (120 + 2) °С в паровом стерилизаторе

Время выживания

не менее 5 минут для каждого образца

Приложение 7

1. Штамм бактерий B. licheniformis G выделен в 1984 году при контроле стерильности чашек Петри, подвергнутых стерилизации сухим горячим воздухом.

Подвижная грамположительная палочка. Споры эллиптические, расположенные центрально. На мясопептонном бульоне (рН 7,3 ± 0,1) через 48 часов инкубации при температуре 37 ± 1 °С образует помутнение среды, на поверхности сухую пленку; на мясопептонном агаре (рН 7,3 ± 1) - слабо выпуклые сухие колонии вытянутой звезчатой формы с неровными краями диаметром 4 - 6 мм, врастающие в питательную среду. Штамм непатогенен для человека и животных.

2. Ампулу с лиофилизированной культурой B. licheniformis штамм G вскрывают аналогично приложению , п. 2. Суспензию переносят по 1 - 2 капли в две пробирки с бульоном (бульон Хоттингера, питательный бульон сухой, мясопептонный бульон), содержащим 0,5 % глюкозы.

Посевы инкубируют при температуре 37 ± 1 °С в течение 24 часов. При росте культуры происходит помутнение питательной среды.

3. Суточную бульонную культуру бактериологической петлей или пастеровской пипеткой по 1 - 2 капли пересевают в 10 - 20 пробирок на скошенную питательную среду (агар Хоттингера, питательный агар сухой, мясопептонный агар).

Посевы инкубируют при температуре 37 ± 1 °С в течение 24 часов.

4. Для получения спор культуру, выращенную на твердой питательной среде (п. 3), бактериологической петлей пересевают в бактериологические пробирки или смывают 5 мл стерильной дистиллированной воды и переносят во флаконы вместимостью 250 - 500 мл (10 - 20 штук в зависимости от потребности в суспензии спор), содержащие соответственно 100 - 200 мл скошенного агара (пшеничный агар, картофельный агар).

Для обсеменения каждого флакона в зависимости от его вместимости используют суспензию, смытую с 1 - 2 пробирок соответственно. Взвесь покачиванием флакона равномерно распределяют по поверхности среды. Флаконы закрывают ватномарлевыми пробками с бумажными колпачками и инкубируют при температуре 37 ± 1 °С в течение 7 - 10 суток в наклонном положении (под углом 45°) агаром вверх.

5. На 5, 7 и 10 сутки культуру проверяют на интенсивность спорообразования (выборочно 2 - 3 флакона) аналогично приложению , п. 5.

6. После завершения споруляции культуру осторожно при помощи шпателя из проволоки смывают с поверхности агара 5 - 10 мл стерильной дистиллированной воды в зависимости от вместимости флакона.

7. Для удаления вегетативных клеток полученную суспензию прогревают при температуре от 65 до 70 °С в течение 30 минут в водяной бане (экспозиция с момента достижения температуры на термометре, опущенном в контрольную аналогичную емкость с таким же количеством воды), центрифугируют в стерильных центрифужных пробирках, закрытых ватно-марлевыми пробками, с частотой вращения 33,33 с -1 (2000 об/мин) в течение 15 минут. Далее надосадочную жидкость осторожно удаляют, а осадок трехкратно промывают стерильной дистиллированной водой, чередуя с центрифугированием, после чего споры суспендируют в стерильной дистиллированной воде в соотношении 1:1 по объему.

8. Суспензию спор хранят в холодильнике при температуре 4 °С в стерильных пробирках, закрытых ватно-марлевыми пробками с резиновыми колпачками. Срок хранения 2 года.

9. Для получения культуры производят высев из пробирок с суспензией, заложенной на хранение, в пробирки с бульоном (бульон Хоттингера, питательный бульон сухой, мясопептонный бульон), содержащим 0,5 % глюкозы (2 пробирки), и далее получают споры по описанной выше методике (приложение, п. 2 - 7).

10. Чистоту культуры на всех этапах культивирования контролируют высевом на чашки Петри с агаром (агар Хоттингера, мясопептонный агар).

11. Для определения титра жизнеспособных спор 0,1 мл исходной суспензии пипеткой переносят в пробирку, содержащую 0,9 мл стерильной дистиллированной воды (разведение 10 -1). Подобным образом последовательно получают десятикратные разведения культуры, меняя пипетку для каждого разведения. Из трех последовательных десятикратных разведений исходной суспензии (предел разведения зависит от титра полученных спор - ориентировочно от 10 -7 до 10 -9) производят высев по 0,1 мл суспензии на поверхность трех чашек Петри с агаром (агар Хоттингера, мясопептонный агар).

Чашки Петри инкубируют при температуре 37 ± 1 °С в течение 48 часов, после чего производят подсчет выросших колоний.

12. Титр жизнеспособных спор в исходной суспензии определяют аналогично приложению , п. 12.

13. В качестве носителей тест-культуры B. licheniformis штамм G используют флаконы, чашечки из алюминиевой фольги или диски из фильтровальной бумаги. Флаконы тщательно моют, закрывают ватно-марлевыми пробками. Из алюминиевой фольги, фильтровальной бумаги вырезают диски диаметром 14 мм, неоточенной стороной карандаша в дисках из алюминиевой фольги делают вдавление - луночку.

14. Подготовленные носители стерилизуют паровым методом при температуре 120 + 2 °С, время стерилизационной выдержки 45 минут или воздушным методом при температуре °С, время стерилизационной выдержки 60 минут в упаковке из бумаги (чашечки из фольги и диски из фильтровальной бумаги раскладывают в чашки Петри).

15. Стерильные носители с помощью дозатора пипеточного (ТУ 64-1-3329-81) обсеменяют суспензией спор тест-культуры B. licheniformis штамм G из расчета 5 × 10 2 - 5 × 10 3 спор на носитель, что достигается нанесением на каждый носитель 0,02 мл суспензии спор в дистиллированной воде титром 2,5 × 10 4 - 2,5 × 10 5 спор в 1 мл.

16. Носители высушивают в термостате при температуре 37 ± 1 °С или эксикаторе под осушителем (силикагель, хлористый кальций) при комнатной температуре в течение 24 часов.

17. Каждый биотест закладывают в пакет из упаковочной бумаги (флаконы без ватно-марлевых пробок во избежание возгорания) или заворачивают в бумагу упаковочную по типу порошка (чашечки из алюминиевой фольги, диски из фильтровальной бумаги), раскладывают в полиэтиленовые пакеты, маркируют и запаивают.

18. Для определения фактической плотности обсеменения используют не менее трех биотестов от каждой партии. Во флаконы вносят 1,0 мл стерильной дистиллированной воды (чашечки из алюминиевой фольги и диски из фильтровальной бумаги отмывают в бактериологических пробирках с бусами в 1 мл) и встряхивают в течение 10 минут на аппарате для встряхивания жидкостей с последующим высевом на поверхность трех чашек Петри с агаром (агар Хоттингера, питательный агар сухой, мясопептонный агар) по 0,1 мл суспензии из исходной суспензии и двух последовательных десятикратных разведений исходной суспензии. Среднее число спор в биотесте должно быть в соответствии с приложением , п. 15.

19. Определение устойчивости спор тест-культуры B. licheniformis штамм G к действию сухого горячего воздуха проводят при температуре 160 ± 2 °С в воздушных стерилизаторах с принудительной циркуляцией и скоростью движения воздуха более 1 м/с, которые обеспечивают допустимые перепады от номинального значения температуры (ГП-20, ГП-40, ГП-80).

Биотесты в упаковочной бумаге помещают на полку воздушного стерилизатора, предварительно прогретого до 160 °С при исследовании биотестов с использованием чашечек из алюминиевой фольги и дисков из фильтровальной бумаги и до 140 °С при использовании флаконов в качестве носителей. Стерилизатор закрывают и после достижения температуры 160 ± 2 °С начинают отсчет времени воздействия. Через 4 минуты времени выдержки (время выдерживания спор тест-культуры на носителе) аппарат отключают.

Аналогичное исследование проводят в течение 30 минут времени выдержки (время гибели спор тест-культуры на носителе).

Контроль температуры осуществляют по наружному термометру.

По окончании времени выдержки биотесты вынимают из стерилизатора. Культивирование тест-культуры B. licheniformis штамм G осуществляют в бактериологической лаборатории в соответствии с приложением , п. 11 - 19.

20. Партию биотестов считают годной для использования, если показатели устойчивости спор тест-культуры B. licheniformis штамм G соответствуют требованиям, указанным в таблице.

Таблица

Наименование показателя

Норма

Метод исследования

Устойчивость спор тест-культуры B. licheniformis штамм G на носителе к действию сухого горячего воздуха температурой 160 ± 2 °С в воздушном стерилизаторе

Время выживания

не менее 4 минут для каждого образца

Приложение 8

1. Картофельный агар

Сырой картофель (из расчета 200 г очищенного картофеля на 1 л водопроводной воды) тщательно моют, очищают от кожуры и глазков, нарезают мелкими ломтиками, заливают водопроводной водой и кипятят 30 минут после закипания (молодой картофель употреблять нельзя). Отвар отстаивают и фильтруют в холодном состоянии через ватно-марлевый фильтр. Доводят объем фильтрата до первоначального. Устанавливают рН 7,1 ± 0,1. Добавляют пептон и агар. Нагревают, помешивая, до полного расплавления агара, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, после чего добавляют мел. Разливают по флаконам, стерилизуют при 120 °С в течение 30 минут. После стерилизации среду во флаконах скашивают.

2. Пшеничный агар

Пшеничную крупу "Артек" (или "Полтавская") заливают дистиллированной водой. Через 12 часов настой аккуратно сливают, не выжимая, доводят до первоначального объема, добавляют агар и растапливают на водяной бане или автоклаве (текучим паром 1 час). Остывший агар выкладывают на противень и срезают осадок. Агар растапливают на водяной бане, постоянно помешивая. Устанавливают рН 7,3 ± 0,1. Разливают в нужную посуду. Стерилизуют текучим паром по 1 часу в течение 3 суток. После стерилизации среду скашивают.

3. Бульон Хоттингера

Смешивают мясной перевар по Хоттингеру с водой в таком соотношении, чтобы в среде содержалось от 140 до 160 мг% аминного азота, добавляют хлористый натрий. Кипятят на слабом огне с закрытой крышкой 10 минут до полного растворения соли. Если есть выкипание, доводят объем до первоначального дистиллированной водой. Устанавливают рН 7,3 ± 0,1, кипятят повторно. Фильтруют, прибавляют глюкозу. Разливают в стерильную посуду. Стерилизуют при 110 °С в течение 30 минут.

4. Агар Хоттингера

К готовому бульону Хоттингера (содержание аминного азота от 140 до 160 мг%) без глюкозы добавляют агар и кипятят на слабом огне при постоянном помешивании до полного расплавления. Фильтруют и стерилизуют при температуре 120 °С в течение 30 минут.

5. Полусинтетическая среда с индикатором феноловым красным

Аммоний фосфорнокислый однозамещенный (NH 4 H 2 PО 4)
Магнии сернокислый (MgSО 4)
Калий хлористый (KCl)

Феноловый красный
Бульон Хоттингера (содержание аминного азота от 140 до 160 мг%)
Дистиллированная вода

Компоненты смешивают и растворяют при нагревании на водяной бане. Доводят ph до 7,7 ± 0,1, разливают во флаконы и стерилизуют при 110 °С в течение 30 минут.

6. Питательный бульон сухой (Дагестанский НИИ питательных сред, г. Махачкала, ул. Леваневского, 24)

Для приготовления бульона с глюкозой добавить 0,5 % глюкозы.

7. Питательный агар сухой (Дагестанский НИИ питательных сред, г. Махачкала, ул. Леваневского, 24)

Готовят согласно прописи на этикетке.

8. Среда питательная для контроля стерильности сухая. (Предприятие Центрального НИИВС им. И.М. Мечникова, 143422, Моск. обл., Красногорский р-н, с. Петрово-Дальнее)

Ферментативный гидролизат казеина неглубокой степени расщепления
Витаминный препарат ЭКД
Натрий хлористый
Глюкоза медицинская
Тиогликолят натрия
Цестеин дигидрохлорид
Агар порошкообразный
Натрий углекислый

Готовят согласно прописи на этикетке.

9. Бульон из перевара кровяных сгустков

Методика приготовления изложена в "Справочнике по микробиологическим ивирусологическим методам исследований" (Под ред. М.О. Биргера. М., Медицина, 1982). Для приготовления бульона с глюкозой добавить 0,5 % глюкозы.

Согласно требованиям этого же ОСТа обязательным условием стерилизации растворами изделий медицинского назначения является полное погружение изделий в стерилизационный раствор в разобранном виде, с заполнением каналов и полостей, при температуре раствора не менее 18 °С. Используют только эмалированные емкости (без повреждений) со стеклянными или пластмассовыми крышками. После стерилизации изделия быстро извлекают из раствора с помощью пинцетов или корнцангов, удаляют раствор из каналов и полостей, затем дважды последовательно промывают простерилизованные изделия стерильной водой. Простерилизованные изделия используют сразу по назначению или помещают в стерильную емкость, выложенную стерильной простыней, и хранят не более 3-х суток. В специальном журнале ведут обязательный учет всех циклов химической стерилизации с указанием даты, точного времени стерилизации (закладки, выемки раствора), название используемого препарата и его концентрации.

Препараты, используемые для стерилизации, классифицируются по группам: кислоты или щелочи, перекиси (6 % раствор перекиси водорода), спирты (этиловый, изопропиловый), альдегиды (формальдегид, глутаровый альдегид), галогены (хлор, хлорамин, иодофоры - вескодин), четвертичные аммониевые основания, фенольные соединения (фенол, крезол).

Кроме того, в качестве удобных и экономичных дезинфицирующих растворов могут использоваться универсальные препараты, т. е. позволяющие проводить обеззараживание от всех форм микроорганизмов (бактерий, в том числе микобактерий туберкулеза, вирусов , включая ВИЧ, патогенных грибов) или комбинированные препараты («Дезэффект», «Аламинал», «Септодор», «Виркон»), совмещающие одновременно два процесса - дезинфекцию и предстерилизационную обработку.

Комплекс дезинфекционных мероприятий, ориентированных на удаление или уничтожение возбудителей инфекционных болезней в объектах или на биотических объектах окружающей среды, т. е. при их передаче от источника к восприимчивым людям, делится на 2 вида: очаговая дезинфекция и профилактическая дезинфекция.

Очаговая дезинфекция осуществляется в эпидемических очагах и в свою очередь подразделяется на текущую, если источник возбудителя присутствует, и заключительную, если источник удален.

Текущая дезинфекция направлена на постоянное обеззараживание экскрементов, рвотных масс, мокроты, патологического отделяемого, перевязочного материала и др. объектов в окружении больного, которые обсеменены или могли быть обсеменены возбудителями в течение всего периода, пока больной или носитель служат источником возбудителя инфекции.

Заключительная дезинфекция направлена на уничтожение патогенных микроорганизмов, оставшихся в очаге в жизнеспособном состоянии н различных предметах, хотя источник удален, т. е. после госпитализации, выздоровления или смерти больного. При заключительной дезинфекции обработке подлежат помещения, экскременты, рвотные массы, белье, предметы быта и все другие объекты, которые могли быть контаминированы возбудителями данного заболевания. Этот вид дезинфекции, как правило, осуществляется специализированными службами органов госэпиднадзора.

Профилактическая дезинфекция проводится в том случае, если источник инфекции не обнаружен, но предполагается возможность его существования. Этот вид дезинфекции чаще всего используют в медицинских учреждениях (профилактика профессионального заражения медицинского персонала внутрибольничных инфекций), на предприятиях общественного питания, предприятиях, изготавливающих, перерабатывающих и реализующих пищевые продукты, а также в местах массовых скоплений людей, где может находиться источник возбудителя инфекционного заболевания среди здорового населения.

При кишечных инфекциях дезинфекционные мероприятия направлены на очистку и обеззараживание источников питьевого водоснабжения , сточных вод, отбросов, пищевых продуктов, материалов от больного, посуды, белья, пищеблоков, санузлов. В очаге проводят и текущую, и заключительную дезинфекцию.

При инфекциях дыхательных путей дезинфекцию проводят с целью снижения микробного загрязнения воздуха конкретных помещений, что может достигаться путем не только влажной уборки и обеззараживания объектов в окружении больного, но и проветривания или УФ-облучения воздуха в данном помещении.

В очагах трансмиссивных инфекций дезинфекционные мероприятия проводят только при чуме, туляремии, лихорадке Ку, и на объектах, где работают с кровью.

При инфекциях наружных покровов дезинфекции подлежат все вещи, бывшие в употреблении (белье, расчески, ножницы, губки) в банях, душевых, бассейнах, парикмахерских, причем рекомендуется по возможности использовать универсальные препараты, обладающие бактерицидным (в т. ч. спорицидным), вирулицидным, фунгицидным свойствами.

При профилактике внутрибольничных инфекций дезинфекции должны подвергаться все изделия медицинского назначения после каждого пациента, руки персонала, раневая поверхность, операционное поле и т. д. и т. п.

Биологическая стерилизация - основана на применении антибиотиков , используется ограниченно - в культурах тканей для культивирования вирусов.

Контроль стерилизации

Требования по контролю за стерилизующим оборудованием изложен в «Методических указаниях по контролю работы парового и воздушного стерилизатора» 15/6 - 5 от 01.01.2001 г.

Плановый контроль работы стерилизатора проводят не реже 2-х раз в год. Самоконтроль работы стерилизатора проводят при каждой загрузке аппарата.

Контроль стерилизации осуществляется физическими, химическими и биологическими методами.

Физические и химические методы контроля являются методами оперативного контроля параметров режимов работы паровых и воздушных стерилизаторов, результаты которого учитывают в процессе стерилизационного цикла или сразу после его окончания.

Физический метод контроля осуществляют с помощью средств измерений температуры (термометры) и давления (манометры).

Химический метод контроля предназначен для оперативного контроля одного или нескольких в совокупности режимов работы паровых и воздушных стерилизаторов. Осуществляют его с помощью химических тестов и термохимических индикаторов. Химические тесты - это запаянная с обоих концов стеклянная трубка, заполненная смесью химических соединений с органическими красителями, или только химическим соединением, изменяющим свое агрегатное состояние и цвет при достижении для него определенной температуры плавления. Упакованные химические тесты номеруют и размещают в разных контрольных точках паровых и воздушных стерилизаторов. Термохимические индикаторы представляют собой полоски бумаги, на одной стороне которых нанесен индикаторный слой, изменяющий свой цвет на цвет эталона при соблюдении температурных параметров режима стерилизации.

Биологические метод предназначен для контроля эффективности работы стерилизаторов на основании гибели спор тест-культур. Осуществляют его с помощью биотестов. Биотест - дозированное количество тест-культуры на носителе, например, на диске из фильтровальной бумаги, или помещенное в упаковку (стеклянные флаконы для лекарственных средств или чашечки из фольги). В качестве тест-культуры для контроля работы парового стерилизатора используются споры Bacillus stearothermophilus ВКМ В-718, а воздушного стерилизатора - споры Bacillus licheniformis . После стерилизации тесты помещают на питательную среду. Отсутствие роста на питательной среде свидетельствует о гибели спор во время стерилизации.

Биологический контроль

Этот вид контроля проводят 2 раза в год. Для этого используют биотесты, предназначенные для конкретного вида паровой или суховоздушной стерилизации.

Пронумерованные пакеты с биотестами размещают в контрольных точках стерилизатора. После проведенной стерилизации в пробирки с биотестами вносят 0,5 мл цветной питательной среды, начиная со стерильной пробирки для контроля питательной среды и заканчивая контрольным тестом, не подвергавшимся стерилизации (контроль культур).

Далее пробирки инкубируют. После чего проводят учет изменения цвета питательной среды. В контроле (стерильная проба) цвет среды не изменяется. В пробирке с контролем культуры цвет среды должен измениться на цвет, указанный в паспорте, что свидетельствует о наличии жизнеспособных спор.

Работа считается удовлетворительной, если цвет питательной среды во всех биотестах не изменился. Результаты заносят в журнал и регистрируют.

При необходимости контроля за стерильностью медицинских изделий, подвергнутых стерилизации, лаборант бактериологической лаборатории или операционная сестра под руководством сотрудников баклабораторий осуществляют забор проб на стерильность.

Исследование проводят согласно «Методическим рекомендациям по контролю стерильности изделий медицинского назначения». Пробы засевают на питательные среды с соблюдением правил асептики в боксах бактериологической лаборатории. В случаях, когда контролю подвергаются изделия большого размера, пробы забирают путем смыва с них с помощью стерильной салфетки. При отсутствии роста микроорганизмов во всех посевах из проб изделий одной загрузки в стерилизатор они считаются стерильными. При наличии роста хотя бы на одной питательной среде производят повторный контроль удвоенного количества образцов из данной загрузки.

Внутренний контроль качества микробиологических исследований

Внутренний контроль качества микробиологических исследований - это комплекс мероприятий, направленных на контроль стабильности требуемых условий развития искомого микроорганизма.

Организацию внутреннего контроля качества проводят согласно методическим указаниям МУ 2.1.4.1057-01 Минздрава России, Москва, 2001 г.

Система качества при этом охватывает широкий спектр позиций, и, в первую очередь, нормативно-методической документации, всесторонне регламентирующей деятельность лаборатории.

Выделяют основные направления организации внутреннего контроля качества микробиологических исследований:

1. Контроль за соблюдением требований к условиям проведения лабораторного анализа.

2. Выполнение регламентированных процедур ведения тестовых культур.

3. Контроль качества питательных сред.

4. Контроль качества мембранных фильтров.

5. Контроль качества дистиллированной воды.

6. Оценка достоверности качественного результата путем использования заведомо положительных и отрицательных контролей.

7. Оценка доверительных границ полученного количественного результата.

8. Систематический анализ результатов контрольных процедур в целях совершенствования руководства по качеству.

Результаты проведенных контрольных процедур должны быть документально оформлены. Анализ результатов выполнения контрольных процедур обязательно проводить не реже 1-го раза в месяц.

Контроль температурных режимов инкубации

Контроль температуры в термостатах

Контроль температуры в термостатах проводят каждый день перед началом работы, используя поверенные термометры.

Подготовительный этап

На этом этапе для устранения искажения показаний термометра его помещают в пробирку с глицерином (парафином).

Проведение контроля

Для контроля температуры термометр помещают в центре камеры и экстремальных точках.

Перед началом работы необходимо снять показания контрольного термометра, которые заносят в журнал. Если допустимые отклонения превышены, то необходимо поставить в известность руководителя.

Контроль температуры в холодильниках

Процедуру контроля проводят один раз в неделю при температуре 4-8 °С, используя поверенные термометры.

Проведение контроля

Термометр помещают в центр камеры холодильника. Показания снимают один раз в неделю перед началом работы, и результаты измерений вносят в журнал.

В случае превышения допустимых отклонений температуры об этом необходимо поставить в известность руководителя. После приведения температуры до уровней допустимых значений, двукратно, через 4 часа и на следующий день, регистрируют температуру.

Контроль качества стерилизации и дезинфекции

Контроль режима паровой и суховоздушной стерилизации

Для контроля режимов стерилизации используют три вида контроля:

· химический (каждый цикл стерилизации);

· термический (1 раз в 2 недели);

· биологический (2 раза в год).

Химический и термический контроль режима стерилизации должен проводить оператор парового стерилизатора.

Биологический контроль проводит бактериолог или сотрудник дезинфекционных станций по заказу бактериологической лаборатории. При отрицательном результате контроля использование всей партии материала запрещается, и он повторно обрабатывается.

Химический контроль

Контроль паровой стерилизации

Этот вид контроля проводят при каждом рабочем цикле с помощью бумажных индикаторов стерилизации (НСТО «Винар») или химических веществ - тестеров.

При проведении исследования в контрольных точках рабочей камеры устанавливают герметично запаянные ампулы с химическим тестовым веществом или к стерилизационным коробкам прикрепляют индикаторные полоски.

До 100,0 л - 5 контрольных точек в камере;

100,0 л - 750,0 л - 11 контрольных точек в камере;

Свыше 570,0 л - 13 контрольных точек в камере.

1-ая точка находится у загрузочной двери, вторая - у противоположной стенки (в вертикальном автоклаве - в верхней и нижней части камеры). В 1-ой и 2-ой точках тесты располагаются вне стерилизуемых изделий, а в остальных точках тесты располагают в центре стерилизационных коробок.

Контроль суховоздушной стерилизации

Число контрольных точек зависит от емкости стерилизационной камеры:

До 80,0 л - 5 контрольных точек в камере;

Свыше 80,0 л (однокамерныйконтрольных точек;

Свыше 80,0 л (двухкамерныеконтрольных точек.

В контрольных точках рабочей камеры используют герметично запаянные ампулы с химическим тестовым веществом или индикаторную полоску, которые прикрепляют к упаковкам или стерилизуемым изделиям.

При контроле в 5 точках 1 точка располагается в центре камеры, а точки 2, 3, 4, 5 расположены в нижней части камеры по углам, причем 2 и 5 точки находятся перед загрузочной дверью справа и слева, а 3 и 4 точки - глубине камеры.

В случае 15 точек - точки 1, 2, 3 располагаются в центре камеры на трех уровнях сверху вниз; а точки 4-15 - по углам, но также на трех уровнях (точки 4-7 - низ; точки 8-11 - середина; точки 12-15 - верх). Угловые точки нумеруются против часовой стрелки, начиная с правого нижнего угла.

Если контрольных точек - 30, то для каждой камеры их расположение повторяется также как для 15 точек. При этом каждая контрольная точка должка быть расположена на расстоянии не ближе 5,0 см от стенок камеры.

После окончания цикла стерилизации индикаторные системы (ампулы с химическим тестовым веществом) извлекают из контрольных точек сравнивают с эталоном.

Термический контроль

Этот вид контроля проводят 2 раза в месяц, используя поверенный максимальный термометр, цена деления которого не более 1 оС, а диапазон измерений превышает контролируемую температуру. При этом термометр размещают в середине стерилизационной камеры. После окончания цикла стерилизации и остывания термометра до комнатной температуры, снимают показания и заносят в журнал.

Контроль качества дистиллированной воды

Дистиллированная вода используется для заправки автоклавов (паровых стерилизаторов), мытья лабораторной посуды, приготовления растворов и питательных сред, поэтому ее качество должно соответствовать требованиям ГОСТа 6709- 72 и проходить контроль не реже 1 раза в месяц.

Воду, предназначенную для хранения, разливают в стеклянные или пластиковые бутыли с нижним сливом, плотно закрытые крышками.

При использовании деминерализованной воды необходимо обращать внимание на содержание микроорганизмов, которые могут размножаться на фильтрах и, соответственно, попадать в воду.

Для санитарно-микробиологического контроля состояния воды используют: ГОСТ 6709-72 «Вода дистиллированная», ГОСТ «Продукты пищевые», Общие правила микробиологических исследований ISO 3696-84 «Вода для аналитических лабораторных исследований», Сертификация и методы испытания. ISO 9998: 1991(E) «Качество воды. Методы очистки и контроля микробиологического подсчета колоний в средах с применением тестов качества воды».

Центральное стерилизационное отделение

Задача центрального стерилизационного отделения (ЦСО) состоит в обеспечении лечебно-профилактических учреждений стерильными изделиями медицинского назначения: хирургическими инструментами, шприцами, иглами, контейнерами, хирургическими перчатками, лейкопластырями, перевязочными и шовными материалами и др.

Функции центрального стерилизационного отделения (ЦСО):

Прием, хранение различных материалов до их обработки и стерилизации;

Разборка, выбраковка, учет изделий;

Предстерилизационная очистка (мытье, сушка);

Комплектование, упаковка, укладка в стерилизационную тару;

Стерилизация изделий;

Контроль качества предстерилизационной очистки и стерилизации;

Ведение документации и строгий учет приема и выдачи изделий;

Выдача стерильных изделий больницам, поликлиникам.

Помещения любого центрального стерилизационного отделения (ЦСО) обычно подразделяются на 2 зоны: нестерильную и стерильную.

В нестерильной зоне располагаются: моечная, комната изготовления, укладки и упаковки перевязочных материалов, комната обработки перчаток, стерилизационная (загрузочная сторона стерилизатора, нестерильная половина), комната контроля, комплектации и упаковки инструментов, кладовая упаковочных материалов, кабинет персонала, санитарный узел.

В стерильной зоне располагаются: стерилизационная (разгрузочная сторона стерилизатора, если они шкафного типа), склад для стерильных инструментов, экспедиция.

Уборку производственных помещений ЦСО проводят 1 раз в день с обязательным применением дезинфицирующих средств.

При планировании работы ЦСО необходимо предусматривать организацию 2-х поточной обработки:

1 поток - обработка и стерилизация инструментов, шприцов, игл,
резиновых изделий.

2 поток - подготовка и стерилизация белья и перевязочного материала.

Классификация антисептиков по механизму действия

1. Поверхностно-активные (жирные кислоты, мыла, детергенты) действуют поверхностно, вызывая повреждение клеточной стенки.

2. Фенол, крезол и их производные повреждают клеточную стенку и клеточные белки.

3. Формальдегид вызывает денатурацию белков не только вегетативных форм бактерий, но и спор.

4. Окислители (КМnO2, Н2О2) – биологические яды, активным является атомарный кислород.

6. Акридины обладают сродством к нуклеиновым кислотам, нарушают процессы клеточного деления и вызывают инактивацию микроорганизмов.

7. Соли тяжелых металлов вызывают коагуляцию белков, обладают бактерицидным действием по отношению к бактериям и вирусам.

Самостоятельная работа студента

на практическом занятии

1. Демонстрация опыта действия солнечного света на бактерии (опыт Бухнера).

На чашку Петри с МПА делают обильный посев культуры, затем на агар накладывают буквы, вырезанные из черной бумаги и предварительно простерилизованные. Открытая чашка подвергается действию прямых солнечных лучей в течение 1–1,5 часа, после чего буквы снимают и ставят чашки Петри в термостат на 24 часа. Рост культур произойдет только в тех местах, которые были защищены черными буквами от действия солнечных лучей.

2. Знакомство с автоклавом и сухожаровым шкафом.

3. Подготовка лабораторной посуды к стерилизации. Студенты готовят к стерилизации чашки Петри, колбы, пипетки и др.

4. Демонстрация бактериальных фильтров (Шамберлана, Зейтца).

5. Проведение бактериологического контроля работы автоклава. В автоклав помещают кусочек марли, смоченной тест-микробом, и помещают в автоклав. После окончания работы автоклава этот кусочек стерильным пинцетом помещают в пробирку с МПБ и инкубируют в термостате 24 часа. При правильном режиме работы МПБ остается прозрачным (стерильным).